1. Определение понятия «иммунитет», феномены иммунитета, «иммунологическая память». Система иммунитета: подсистемы, центральные и периферические органы. Центральные понятия системы иммунитета: антигены, антитела, рецепторы, цитокины

30.РИФ:виды,ингредиенты.

31.ИФА:ингредиенты,цель постановки, учет реакции.Иммуноблотинг.
В методах иммуноферментного анализа (ИФА) используют иммунореагенты, меченные ферментами (рис. 5.5). Наиболее широко применяется твердофазный ИФА. В качестве твердой фазы чаще всего используют полистироловые или поливиниловые планшеты или шарики, на которых адсорбированы антигены или антитела. Для выявления антител известный антиген адсорбируют в лунках полистироловой пластины. Затем вносят исследуемую сыворотку, в которой хотят обнаружить антитела к данному антигену. После инкубации лунки промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченные ферментом (обычно пероксидазой). После инкубации и отмывания в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат (перекись водорода) и хромоген (орто-фенилендиамин) для регистрации конечных продуктов расщепления субстрата. О наличии и количестве антител судят по изменению цвета и интенсивности окраски раствора. Для регистрация окраски используют специальные спектрофотометры с вертикальным ходом луча (ридеры-мультисканы). Методы ИФА обладают высокой чувствительностью и специфичностью и получили широкое распространение в различных областях биологии и медицины. Иммуноблотинг (вестерн-блотинг). Часто бывает, что АГ представляет собой сложную смесь разнородных молекул. С другой стороны, к такому комплексному АГ вырабатывается набор различных АТ. Для одновременного обнаружения различных фракций АГ либо АТ в исследуемом материале применяют метод вестерн-блотинга. В частности, он используется при диагностике ВИЧ-инфекции для обнаружения АТ к различным вирусным АГ. Для этого известный набор вирусных белковых АГ подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле. АГ мигрируют в геле в зависимости от их молекулярной массы и заряда. После окончания электрофореза на пластину с гелем накладывают лист нитроцеллюлозной мембраны (НЦМ) и проводят повторный электрофорез в поперечном направлении. АГ выходят из геля и прикрепляются к листу нитроцеллюлозной мембраны. Далее лист НЦМ с отпечатками АГ (блот – отпечаток) обрабатывают сывороткой больного, содержащей АТ. Если АТ есть, то они связываются с НЦМ по месту локализации различных фракций АГ. Далее метод не отличается от гетерогенного иммуноферментного анализа: НЦМ промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченные ферментом (пероксидазой). После инкубации и отмывания НЦМ помещают в раствор субстрата (перекись водорода) и хромогена (диаминобензидин и др.) О количестве фракций антител к различным АГ фрагментам судят по появлению нескольких окрашенных пятен на НЦМ.