Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных

Рабочая 
методика 
выделения 
митохондрий 
из 
этиолированных проростков
1. Приготовление рабочих растворов (среды выделения, 
промывания, ресуспендирования, инкубации). Доведение рН до 

---

22 
необходимого значения осуществляется с помощью 40% КОН (до 
значения рН 7,0) и более осторожно 20% КОН до рН 7,35-7,4. При 
необходимости используют конц. HCl.
Среда выделения (является основой для приготовления всех 
сред), рН 7,4 
Компоненты 
Концентрация 
Количество вещества в 
г/100мл 
Сахароза 300 
мМ 10,260 
MOPS 40 
мМ 0,837 
ЭДTA 5 
мМ 0,186 
KCl 10 
мМ 0,075 
MgCl
2
1 
мМ 0,009 
цистеин 0,05% 
0,050 
БСА 0,1% 
0,100 
Среда промывания, рН 7,4 состоит из тех же компонентов 
что и среда выделения, за исключением цистеина. Концентрация 
БСА составляет 0,4%. 
Среда ресуспендирования, рН 7,4 имеет такой же состав, 
что и среда промывания, но не содержит БСА. В некоторых случаях 
дополнительно включают 4 мМ АТФ, 6 мМ АДФ и субстрат 
окисления. 
Раствор 20% БСА готовится на среде промывания и 
хранится в морозильной камере. 
Последовательность приготовления сред для выделения 
митохондрий следующая. Допустим необходимо приготовить среды 
для выделения митохондрий из 30 грамм растительной ткани. 
Вначале рассчитывается необходимый объем всех сред. Среда 

---

23 
выделения рассчитывается, исходя из соотношения: 1:4, то есть на 
30 г нужно 120 мл среды. Среды промывания готовится 20 мл (из 
них 10-12 мл используется). Среда ресуспендирования готовится в 
объеме 10 мл (к митохондриям добавляется 0,6 мл). Объемы всех 
сред суммируют (в данном случае общий объем равен 150 мл – на 
это объем необходимо рассчитать количество веществ в г, 
являющихся компонентами сред). В стеклянном стакане растворяют 
указанные компоненты, за исключением цистеина, доводят до 
нужного объема бидистилированной водой и доводят рН (при 
постоянном перемешивании). Затем раствор фильтруют, отливают 
объем, необходимый для среды промывания и для среды 
ресуспендирования. В среду ресуспендирования добавляются 
необходимые компоненты, доводится рН. В оставшуюся после 
фильтрации среду (объем среды выделения) добавляется цистеин, 
все перемешивается, доводится рН и среда фильтруется. Растворы 
остаются в холодильнике до охлаждения. 
Все среды готовятся накануне выделения митохондрий и на 
ночь оставляются в холодильнике. На следующий день в среду 
выделения добавляется цистеин (50 мг/100 мл), проверяется и 
доводится до соответствующих значений рН всех сред. Щелочь и 
кислота добавляются стеклянной палочкой (первоначально при 
добавлении большого объема щелочи в среду выделения 
используется капельница). Каждый раз перед новым добавлением 
палочка обмывается бидистиллированной водой и обсушивается 
фильтровальной бумагой. При доведении рН осуществляется 
постоянное перемешивание растворов на магнитной мешалке. 
После получения нужных значений рН растворы помещают в 
кристаллизатор со льдом и ставят в холодильник.