Embrion genda ildiz meristema hosil bo'lishi uchun zarur The Arabidopsis hobbit

O'simliklarning o'sish sharoitlari, o'simlik shtammlari va mutagenezi
Mutagenez tajribalari uchun Arabidopsis thaliana ekotipi Columbia-0 ishlatilgan
(tarkibida
b-glukukuridaza
bilan birlashgan tomirlarda ifodalangan S-adenosil-
metionin-sintetaza (SAM) genining promotoridan iborat marker transgeni
mavjud). ;
Peleman va boshqalar, 1989). Quruq urug'lar yangi tayyorlangan
10 mM etil metan sulfonat (EMS) bilan 22 ° C da 24 soat davomida suvda
mutagenizatsiya qilindi. Urug'lar tuproqqa ekilgan va 22 ° C haroratda, 75%
namlikda 16 soat yorug'lik va 8 soat qorong'i tsikl bilan o'simlik kamerasida
o'stirilgan.
10 000
M1
oilasini
ifodalovchi yagona silikalar yig'ib olindi, so'ngra
urug'lar 0,1% agarozada to'xtatildi va 0,8% o'simlik agar (Duchefa) va 50 mkg /
ml ampitsillin o'z ichiga olgan muhitga qo'yildi. Alohida oilalarda birlashtirilgan
M2 ko'chatlari Zeiss stemi SV-6 diseksiyon mikroskopi ostida ildiz uzunligi
keskin qisqartirilgan mutantlarni oldindan tanlash va tozalangan namunalardagi
ildiz qopqog'i tuzilishini keyingi tahlil qilish orqali ildiz meristema nuqsonli
mutantlari uchun skrining qilindi (pastga qarang) .
Aberrant ildiz qopqog'i
tuzilishiga ega nomzod mutantlarning aka-ukalaridan olingan
M3 nasli mutant
fenotipi uchun qayta sinovdan o'tkazildi va embrion rivojlanishidagi
anormalliklarni aniqlash uchun Nomarski optikasi yordamida tozalangan
tuxumdon preparatlari (pastga qarang) tekshirildi .
Col-0 o'simliklarini changlatish
uchun
hbtGVI-20/1
heterozigot o'simliklari (Ler ekotipi)
rekombinatsiya
xaritasi ishlatilgan va
mutantlarni ajratuvchi
F1 o'simliklari tanlangan.
Yetuk embrionning kotiledon epidermisidagi hujayralar soni aylana bo'ylab va
o'rta bo'ylama bo'limlarda ham kotiledonlar, ham apikal meristemani
ko'rsatadigan holda hisoblangan.