Embrion genda ildiz meristema hosil bo'lishi uchun zarur The Arabidopsis hobbit

To'qimalar madaniyati
Gipokotildagi hujayralar soni 10 kunlik xloralgidratdan tozalangan
ko'chatlarda aniqlandi. Kortikal hujayralar fayllarda eng yuqori ildiz tuklaridan
kotiledon bifurkatsiya nuqtasigacha hisoblangan.
Kolumella ildiz qopqog'idagi kraxmal granulalari 1/2 GM da o'stirilgan 3
kunlik ko'chatlarda 1% lugol eritmasi (Merck) bilan ingl.
Malumot birikmalarida to'ldirmaslik kuzatildi
To'qimalarni madaniyati Valvekens tomonidan ta'riflanganidek amalga oshirildi
Ko'chatlar 3 daqiqa davomida bo'yalgan, suv bilan yuvilgan, xloralgidrat bilan
tozalangan va Agfa APX-25 plyonkasi bilan Zeiss III fotomikroskopida
Nomarski optikasi bilan suratga olingan.
Ildizning hujayralar soni xloral-gidrat bilan tozalangan ko'chatlarda sokin
markazdan eng yuqori ildiz tuklarigacha cho'zilgan fayllardagi kortikal
hujayralarni hisoblash orqali aniqlandi. Ildiz uzunligini o'lchash uchun ko'chatlar
10 kun davomida 1/2 GM (8 g / l Duchefa o'simlik agari, 2,2 g / l Murashige va
Skoog tuzlari, shu jumladan vitaminlar, 1% saxaroza) da o'stirildi. Ko‘chatlar
tozalangandan so‘ng, VIDAS RT tasvirni tahlil qilish tizimi (Zeiss/Kontron)
yordamida so‘rov bo‘yicha (M. Terlou, Tasvirni qayta ishlash va dizayn
departamenti), Padualaan 8, 3584 CH Utrext).
Komplementatsiyani tahlil qilish
Komplementatsiya testlarida biz hobbit allellarini (dominant SAM-GUS belgisi
bilan) donor sifatida Ler yoki hbte56 allellarini qabul qiluvchi sifatida
birlashtirdik, bu esa muvaffaqiyatli o'zaro changlanish hodisalarini tanlash imkonini beradi.
Transgenik marker chiziqlaridagi b-glyukuronidaza faolligi n-dimetil-
formamid, 0,1% Triton X-100, 0,5 mMda erigan 0,5 mg/ml X-glyukda (Biosynth
AG) 37°C da 2-16 soat davomida bo‘yash orqali ko‘rsatilgan. K4Fe(CN)6.H2O,
0,5 mM K3Fe (CN)6 va 50 mM natriy fosfat buferi, pH 7,2.
Fenotipik tahlil Barcha
hbt mutantlari fenotipik tahlildan oldin kesib o'tgan. Miqdoriy tahlil qilish uchun,
ikkinchi sayt modifikatorlarining ta'sirini baholash uchun kesib o'tishda turli
pastki chiziqlar natijalari solishtirildi. Ko'chatlarni tahlil qilish uchun urug'lar 2
kun davomida 4 ° C haroratda saqlanadi va 0,8% plantagar o'z ichiga olgan
muhitga qo'yiladi va vertikal ravishda o'stiriladi. Embrionlarni o'rganish uchun
tuproqda o'sadigan geterozigotli o'simliklarning silikalari yig'ib olingan va
tuxumdonlarni yig'ish uchun parchalanuvchi mikroskop ostida ochilgan.
Fiksatsiya, joylashtirish, kesish va ko'chatlar va embrionlarning gistologik tahlili
uchun mikroskopiya yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi (Scheres va
boshq., 1994, 1995). Embrion fenotiplarini miqdoriy tahlil qilish uchun
tuxumdonlar 10 daqiqa davomida 8: 3: 1 xloralgidrat aralashmasida tozalandi:
distillangan suv: glitserin (Mayer va boshq., 1991) va embrionlar Zeiss III
fotomikroskopida Nomarski optikasi yordamida vizualizatsiya qilindi.
Oltita hbt alleli, 2311, 5721, 5859, 8052, 9620 va 9624 topildi. M1
oilalarining
7,7 foizi xlorofill mutantlarini ajratdi va 6 ta monopter va 7 gnom allellari tiklandi
(T. Berlet va U. Mayer tomonidan qo'shimcha tahlil, ma'lumotlar ko'rsatilmagan).
Hbt1611
alleli yuqoridagi kabi, lekin Landsberg
erecta urug'lari yordamida
amalga oshirilgan alohida mutagenez tajribasidan tiklandi . Hbt allellari
GVI-20/1, GVII-24/1, G221-30/2 (Ekotip Landsberg erecta ) G. Yurgens
(Tyubingen universiteti) va hbte56 allellari (Kolumbiya ekotipi-0) C tomonidan
taqdim etilgan. Bellini va X. Xöfte (INRA, Versal). Columella marker chizig'i
35S :: B2 (Benfey va boshq., 1990) va lateral ildiz qopqog'i belgisi LRC244
(Malamy va Benfey, 1996) P. Benfey (Nyu-York universiteti) tomonidan taqdim
etilgan; "bazal embrion" marker liniyasi AtEM101 (Topping va Lindsey, 1997)
K. Lindsey (Dyurem universiteti) tomonidan taqdim etilgan.
Machine Translated by Google

---

HOBBIT
monopterlar va gnom allellari va ekranning to'yinganlik darajasiga
yaqinlashganligini ko'rsatdi (Qarang: Materiallar va usullar). Bizning
ekranimizda biz funktsional ildiz meristemasi bo'lmagan, lekin ko'chatlari
aniq ko'rinishga ega bo'lgan bir nechta boshqa mutantlarni aniqladik
(Scheres va boshq., 1996). Ushbu qo'shimcha mutantlar har bir lokusda
asosan bitta allelga ega bo'lgan boshqa komplementatsiya guruhlarini
aniqladilar, bu ularning funktsiyalarini to'liq yo'qotadigan allellarni
ifodalamasligini ko'rsatishi mumkin.