Ферментативное расщепление протеинов

Посуда и оборудование 
3 колб Эрленмейера (150мл) 
9 колб Эрленмейера (50мл) 
1 бюретка (50мл) 
3 мерные пипетки (10 мл) 
1 пипеточный шарик 
20 Пипетка Пастера (пластиковая) 
1 водяная баня 

---

1 бутыль для отходов (1 л) с маркировкой WASTE 
Перед началом работы необходимо создать следующие условия: 
Раствор формальдегида и фенолфталеина, pH 7,0, должен быть свежо приготовлен 
1. Надо приготовить 100 мл раствора формальдегида (10% масс./об.), разбавив 36% 
исходного раствор формальдегида с деионизированной водой. 
2. После этого, добавить 1 мл 0,2% раствора фенолфталеина в этаноле в 10% раствор 
формальдегида. 
3. А потом мы должны титровать раствор с 0,1 моль л–1 NaOH. Конечная точка указывается 
как первая видимая изменение цвета смеси на светло-розовый. 
4. А теперь надо наливать раствор (100 мл) в стеклянную бутылку с надписью 
«Формальдегид-фенолфталеин» раствор, рН 7,0”. 
Процедура эксперимента 
I. Каталитический гидролиз казеина трипсином. 
1. Возьмите 3 колбы Эрленмейера (50 мл) и добавьте 5 мл раствора формальдегида, фенола и 
фталеина. 
в каждую колбу. Пометьте колбы цифрами от 1 до 3 (колба 1-3). 
2. Возьмите 1 колбу Эрленмейера (150 мл) и добавьте в нее 50 мл раствора казеина (А). Держать 
колбу на водяной бане (37 С) в течение 10 мин. 
3. Одновременно с этапом 2 поместите флакон с TYP на водяную баню (37 C) и инкубируйте в 
течение 
10 минут. 
4. Перенесите 5 мл раствора TYP в колбу с казеином (А). Хорошо перемешайте и запустите таймер. 
5. Перенесите 10 мл реакционной смеси в колбы на 50 мл, обозначенные цифрами 1, 2 и 3 (колбы 
1-3). 
через 2 мин, 4 мин и 6 мин соответственно. 
6. Повторите шаги 1–5, чтобы завершить эксперименты с растворами казеина B и C. 
II. Определение концентрации аминокислот после гидролиза формальдегидным титрованием 
7. Добавьте по 10 капель раствора фенолфталеина в этаноле в каждую из колб Эрленмейера на 50 
мл. 

---

содержащие образцы. 
8. Оттитровать смесь в колбах Эрленмейера на 50 мл 0,1 моль л–1 NaOH. Конечная точка 
указывается как первое видимое изменение цвета смеси на светло-розовый. Запишите объем (мл) 
потребленного NaOH в следующей таблице 
9.Перелейте все растворы в колбах Эрленмейера (50 мл и 150 мл) в бутыль с маркировкой 
ОТХОДЫ 
мы должны последовательно следовать приведенным выше инструкциям на протяжении всего 
эксперимента 
В качестве результаты эксперимента 1. мы сможем определить концентрацию аминокислот для 
каждого раствора (А, В, С) и заполнить представленный таблицу ниже 
2. Из эти значении можно рассчитать начальную скорость реакции (v10, v20, v30) ферментативного 
гидролиза белка с путем построения графика зависимости концентрации аминокислот от времени 
в соответствии с данными, приведенными в приведенной выше таблице. 
Графики будет выглядеть примерно так: 

---

3. Окончательно, теперь мы сможем построить график зависимости 1/V от 1/S, с этого можно 
определить Vmax и Км. Также график будеть линейном.
Смысл который лежит в основе эксперимента является изучать одним из ферментативный 
механизмы который проводит внутри организма 
Список литературы : 
1. Подготовительные задачи к 54-Международной Химической Олимпиаде 
2. 
Здановский А.Б. Галлургия. –Л.: Химия, 1972. –С.572
3. 
Kлайден ,,Органическая Химия”
4. Биохимия С.Е.Северин