KLİNİK İmmunolojide hastaliğin tanisi iÇİN


Download 446 b.
bet6/11
Sana12.11.2017
Hajmi446 b.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Antikorlar en sık fluoresin isotiyosiyanat (FITC) ile işaretlenir. BUNA GÖRE;

  •  Direk fluoresan antikor (DFA)
    •  Katı fazda klinik örnek (Ag)
    •  Üzerine FITC’li Ab
    •  Pozitif sonuç (fluoresan-yeşil görüntü)
    •  Bakteri ve viruslerin hızlı tanıda
      • Kuduzda negri cisimciği
      • Kolera tanısında
  •  İndirek fluoresan antikor (İFA)
    •  Katı fazda hazır Ag
    •  Hasta serumu(aranan Ab)
    •  FITC’li Anti-Ig
    •  Pozitif sonuç (fluoresan görüntü)
    •  Birçok bakteri virus enf ve otoimmun hast.
      • ♣ FTA- Abs (T.pallidum)
      • ♣ ANA, AMA vb
  • IF yöntemiyle klinik örneklerden hem Ag hem Ab aranır

  • Fluoresan mikroskobu olması ve uzman kişi gereklidir



  • Yöntem aynı IF ve EIA gibidir

    • Yöntem aynı IF ve EIA gibidir

    • Antikorda işaretliyici madde olarak

    •  Gamma sayaçlarında değerlendirilir

    • Radyoaktif madde kullanımından dolayı sınırlıdır

      •  Özellikle hormon testlerinde (TSH, T3, T4) kullanılır
      •  Radyo allergo sorbent (RAST) deneyi
        •  Allerjene spesifik IgE tayininde kullanılır
      •  Radioimmunosorbent (RIST)
      • Serumda total IgE tayininde


      • Antikoru ENZİMLE İŞARETLEME yöntemidir
        • Peroksidaz, alkalin fosfataz ve beta galaktozidaz gibi enzimler
        • Spesifik substratları renkli ürünlere çevirirler
          • Peroksidaz/Orthofenilendiamin
          • Alkali fosfataz/Nitrofenil fosfat
        • Renkli ürünler spektrofotometrede belirli dalga boylarında olurlar
      • Yöntemin;
        • Kullanılan reaktifler uzun ömürlü olması
        • Artık maddelerle ilgili radyasyon sorunu olmaması
        • Uygulamasının basit ve otomatize edilebilmesi yönleriyle
          • Aynı prensipli (işaretleme) RIA ve IF’ye göre avantajlıdır


        • Dezavantajları ise;
          • Antijen saptamada klinik örneğin uygunluğunun değerlendirememesi
          • Bazı viral enfeksiyonlarda düşük Ag yoğunluğu saptanmaması
          • IgM saptanmasında RF-IgM ile çatışmanın olması
            • Bunun için Absorblama işlemi olması


    Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması

      • Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması
      • UYGULAMA PRENSİPLERİ
        • Ag ve Ab (sınıfa özgül) saptayabilir
        • Katı faz olarak;
          • Plastik tabanlı mikrotitrasyon plakları
          • Boncuk veya filtre kullanılır


    Ag kaplı kuyucuk

    • Ag kaplı kuyucuk

    • Hasta serumu (Aranan Ab)

    • Yıkama

    • Enzim işaretli ikincil Ab

    • Yıkama

    • Substrat

    • H2SO4 (Reaksiyonu durdurur)

    • Spektrofotometre





    Katı yüzeyde capture monoklonal yada poliklonal

    • Katı yüzeyde capture monoklonal yada poliklonal

    • Ag içeren hasta serum örneği

    • Yıkama

    • Enzimle işaretli saptayıcı monoklonal yada poliklonal

    • Yıkama

    • Substrat

    • H2SO4 (Reaksiyonu durdurma)

    • Spektrofotometrede okuma





    Katı yüzeyde capture Ab

    • Katı yüzeyde capture Ab

    • Ag içeren hasta serum örneği

    • Yıkama

    • Spesifik bir saptayıcı antikor ilave edilir antijene bağlanır

        • Ag iki antikor arasında kalır
    • Enzimle işaretli ikincil Ab saptayıcı antikora Fc bölgesinden bağlanır

        • HRP ile işaretli
    • Yıkama

    • Substrat

    • H2SO4 (Reaksiyonu durdurma)

    • Spektrofotometrede okuma





        • 4) YARIŞMACI (KOMPETATİF)ELISA:
          • Serumda Ag Arama (Sıklıkla kullanılır)
            • Katı yüzeyde Ab
            • Şüpheli serum (Ag aranan klinik örnek) ve enzimli işaretli antijenin beraber konulduğu antijen rekabet (Competetive) yöntemidir.
            • İşaretli antijen katı yüzeye bağlanırsa, substratla da birleşir RENK OLUŞUR.
            • Bu sonuç klinik örnekteki Ag’nin olmadığı bir sonuçtur.
            • Fakat klinik örnekteki antijen katı faza bağlanırsa enzim olmadığından substratla reaksiyon olmaz. RENK OLUŞMAZ.




        • 5) YAKALAMALI (CAPTURE)ELISA:
          • Sıklıkla;
    •  Enfeksiyoz etkene yönelik,

    •  Spesifik IgM ve IgG saptama testidir

    • 1)Spesifik Ag saptama  Katı faza poliklonal veya M.ab’lar konulur  Poli Ab’ler,

      •  M Ab’lere göre
      •  Farklı Ag epitoplarını
      • bağladığı için güvenilirdir




    • Do'stlaringiz bilan baham:
    1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11


    Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2017
    ma'muriyatiga murojaat qiling