Методичка Гематология

Цель работы: Освоить методику подсчета количества эритроцитов в 
счетной камере Горяева. 
 Реактивы и оборудование: 0,9% раствор хлорида натрия (1) или 
раствор Гайема (2), в который входят (в г) ртуть хлористая – 0,5; натрия 
сульфат – 5,0; натрия хлорид – 1,0; вода дистиллированная до 200 мл; 
счѐтная камера Горяева; микроскоп; меланжер (пробирка Флоринского или 
пенициллиновый флакончик). 
Порядок определения. Исследуемую кровь разводят в 200 раз. 
Разведение в 100 раз применяют в случае, когда количество форменных 
элементов значительно меньше нормы. 
В эритроцитарный меланжер набирают кровь до метки 0,5 и 
разбавляют раствором 1-го или 2-го реактива, наполняя меланжер до метки 
101. Заполненный меланжер энергично встряхивают в течение 20-30секунд 
для равномерного распределения в жидкости. 
Кровь можно разбавить и без меланжера. Для этого в пробирку 
Флоринского или пенициллиновый флакончик отмеряют 4 мл одного из 
реактивов. В пипетку от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови. Кончик 
пипетки вытирают, кровь выдувают на дно пробирки. Пипетку тщательно 
промывают верхним слоем жидкости. Содержимое пробирки перемешивают 
и оставляют до момента счѐта. Перед заполнением счѐтной камеры пробирку 
несколько раз тщательно встряхивают. Пастеровской пипеткой или 
стеклянной палочкой отбирают каплю разведѐнной крови и заполняют 

---

61 
камеру. Рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2-3 ч после взятия 
крови, при гемолитических и В
12
-дефицитных анемиях – сразу после взятия, 
т.к. эритроциты могут разрушиться. Недопустимо оставлять взятую кровь с 
несосчитанными эритроцитами на следующий день, так как эритроциты 
частично разрушаются. 
Перед заполнением камеры к еѐ поверхности тщательно притирают 
покровное стекло. Прикладывают его к краю счѐтной камеры, прижимают 
большими пальцами и двигают в поперечном направлении до появления по 
краям стекла радужных разводов (это свидетельствует о требуемой высоте 
камеры - 0,01 мм). 
Предварительно встряхнув несколько раз меланжер, выдувают на ватку 
3-5 капель смеси и заполняют камеру. Разведѐнную кровь наносят на 
среднюю пластинку камеры, прикоснувшись кончиком меланжера с каплей 
жидкости к краю покровного стекла и следя за тем, чтобы она равномерно, 
без пузырьков воздуха заполнила всю поверхность камеры с сеткой, не 
затекая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном 
положении в течение 1 мин для оседания эритроцитов. 
Для подсчѐта эритроцитов камеру помещают на столик микроскопа и с 
помощью малого увеличения (об. 8, ок. 10 или 15) находят левый верхний 
край сетки (рекомендуется опустить конденсор, прикрыть диафрагму). Счѐт 
производят в пяти больших квадратах, каждый из которых разделѐн на 16 
малых, т.е. в 80 малых квадратах. Клетки считают в квадратах сетки, 
расположенных по диагонали. Для того, чтобы одно и те же эритроциты, 
находящиеся на линиях, не попали в счѐт дважды, принято в каждом 
квадрате, кроме элементов, лежащих внутри него, считать только 
расположенные на определѐнных линиях (например, на левой и верхней). 
Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят, исходя из 
разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого 
квадрата (1/4000мкл), по следующей формуле: 
X=(a х 4000 х 200)/80 

---

62 
где: Х — число эритроцитов в 1 мкл крови; 
- а — число сосчитанных эритроцитов. 
В результате сокращения Х=а х 10000. 
Подсчет эритроцитов в счетной камере является трудоемким и 
недостаточно точным методом.
Содержание эритроцитов в крови здоровых животных отражено в 
таблице 5. 
Таблица 5 
Содержание эритроцитов в крови здоровых животных, 10
12
/л 
Вид животного 
Средний 
показатель 
Предел 
колебания 
Диаметр 
эритроцитов 
(мкм) 
Крупный рогатый 
скот 
Овца 
Свинья 
Лошадь верховая 
Лошадь рысистая 
Лошадь рабочая 
Собака 
Кошка 
Кролик 
Курица 
6,5 
10,0 
6,5 
10,0 
8,6 
6,5 
7,2 
7,4 
5,2 
3,5 
3,5 
5,5-8,0 
8,0-16,0 
6,0-8,0 
8,0-12,0 
7,0-11,0 
5,5-8,0 
5,5-9,8 
6,6-9,4 
4,5-6,5 
3,0-4,0 
3,0-4,0 
5,1 
4,3 
5,0-6,0 
5,6 
5,6 
5,6 
5,6 
5,8 
6,0 
12,0 
7,5 
Основными источниками ошибок при подсчете эритроцитов являются: 
- неточное взятие крови в пипетку; 
- образование сгустка, поглощающего часть клеток и занижающего 
результат исследования; 
- недостаточное перемешивание содержимого пробирки перед 
заполнением камеры. 
Неправильная подготовка камеры: 
- недостаточное притирание покровных стекол; 
- неравномерное заполнение камеры; 
- образование пузырьков воздуха;

---

63 
- подсчет эритроцитов сразу после заполнения камеры, не выжидая 1 
минуту; 
- подсчет меньшего, чем требуется по методике, количества 
квадратов; 
- плохо вымытые камера, пробирки, пипетка, капилляр для взятия 
крови; 
- недостаточно просушенные пробирки и пипетки; 
- использование недоброкачественного разводящего раствора. 
Для выражения количества эритроцитов в 1л в единицах 
Международной системы (СИ) нужно их число в миллионах умножить на 
1012. Например, 4,27 х1012/л.
Следует иметь в виду, что число красных клеток может колебаться в 
зависимости от пола, возраста и конституции животного, от высоты 
местности, времени года и других факторов 
Эритроциты 
обладают 
физиологическими 
и 
физико-
химическими свойствами: 
1. 
Пластичностью. 
Пластичность 
во 
многом 
обусловлена 
строением цитоскелета, в котором очень важным является соотношение 
фосфолипидов и холестерина. Это соотношение выражается в виде 
липолитического коэффициента и в норме составляет 0,9. Пластичность 
эритроцитов – способность к обратимой деформации при прохождении через 
узкие капилляры и микропоры. При снижении количества холестерина в 
мембране наблюдается снижение стойкости эритроцитов. 
2. 
Осмотической 
стойкостью (эритроциты 
способны 
противостоять разрушительному осмотическому воздействию). 
3. 
Наличием креаторных связей, благодаря которым эритроциты 
являются идеальным переносчиками, транспортируют различные вещества и 
осуществляют межклеточное взаимодействие. 
4. 
Способностью к оседанию. Способность к оседанию обусловлена 
удельным весом клеток, который выше, чем все плазмы крови. В норме она 

---

64 
невысока и связана с наличием белков альбуминовой фракции, которые 
способны удерживать гидратную оболочку эритроцитов. Глобулины 
являются лиофобными коллоидами, которые препятствуют образованию 
гидратной оболочки. Соотношение альбуминовой и глобулиновой фракций 
крови (белковый коэффициент) определяет скорость оседания эритроцитов. 
В норме он составляет 1,5–1,7. 
5. 
Агрегацией. Агрегация наблюдается при уменьшении скорости 
кровотока и увеличении вязкости. При быстрой агрегации образуются 
«монетные столбики» – ложные агрегаты, которые распадаются на 
полноценные клетки с сохраненной мембраной и внутриклеточной 
структурой. При длительном нарушении кровотока появляются истинные 
агреганты, вызывающие образование микротромба. 
6. 
Деструкцией. Деструкция (разрушение эритроцитов) происходит 
через 120 дней в результате физиологического старения. Оно 
характеризуется: 
- постепенным уменьшением содержания липидов и воды в мембране; 
- увеличенным выходом ионов K и Na; 
- преобладанием метаболических сдвигов; 
- ухудшением способности к восстановлению метгемоглобина в 
гемоглобин; 
- понижением осмотической стойкости, приводящей к гемолизу.
Стареющие эритроциты за счет понижения способности к деформации 
застревают в миллипоровых фильтрах селезенки, где поглощаются 
фагоцитами. Около 10 % клеток подвергаются разрушению в сосудистом 
русле.