Mundarija kirish I bob alfa Beta gidrolazalar supero ilasi fermentlari katalitik aminokislotalarining qiyosiy bioinformasion taxlili

Jadval 1. Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan plazmidlar.

Qisqacha aytganda, pWD002, pWD024 va pWD025 mos ravishda KmYME, NP_011545 va NP_011529 ning buzilish kassetasi uchun yaratilgan. pWD004 EGFP ifodasi uchun tuzilgan; pWD005 va pWD006 KmYME lokalizatsiya tahlilida KmYME-EGFP va KmCox-RFP ifodasi uchun tuzilgan. pWD007, pWD008 va pWD009 kesilgan KmYME (1-20 aa) -EGFP, KmYME (1-40 aa) -EGFP va KmYME (41-360 aa) -EGFP ifodasi uchun mitoxondriyal signal peptidini aniqlash uchun tuzilgan. pWD026 KmYME buzilgan va buzilmagan shtammlarning mitoxondrial morfologiyasini kuzatish uchun URA3 yorlig'i bilan KmCox-RFP ifodasi uchun yaratilgan. pWD010, pWD034 (pWD010 dan GYSLG→GHSMG) va pWD035 (pWD010 dan GYSLG→AYALA) E. coli BL21 (DE3) hujayralarida T7 promouteri ostida KmYME va KmYME mutantlarini ifodalash uchun tuzilgan. pWD003, pWD032 (pWD003 dan GYSLG→GHSMG) va pWD033 (pWD003 dan GYSLG→AYALA) K. marxianusda ScGAPDH promouteri ostida KmYME va KmYME mutantlarini ortiqcha ifodalash uchun ishlatilgan. Biz ushbu genning buzilishi K. marxianusdagi inhibitorlarga nisbatan tolerantlikni kamaytirishini aniqladik. Ushbu noma'lum protein mitoxondriya matritsasida joylashganligi va inhibitorlarga qarshilik ko'rsatish uchun zarur bo'lgan in vitro esteraza/tioesteraza faolligiga ega ekanligi aniqlandi. Biz ushbu genning buzilishi ingibitorlar ishtirokida ATP va NAD(P)H sinteziga xalaqit beradigan hujayra ichidagi CoASH hovuzini buzish orqali inhibitorlarga nisbatan bardoshlikni pasaytiradi, degan xulosaga keldik. Bundan tashqari, KmYME osmik bosim (shakar va tuz), etanol va haroratni o'z ichiga olgan boshqa stresslarga qarshilikning keng spektrini ko'rsatdi.

Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan barcha xamirturush shtammlari 2-jadvalda keltirilgan va Qo'shimcha 1-faylda tasvirlangan: Qo'shimcha S3-rasm. Transformatsiya lityum asetat usuli yordamida amalga oshirildi (Abdel-Banat va boshq., 2010). Transformantlar tegishli qo'shimchalar bilan SD muhitida skrining qilindi va shablon sifatida genomik DNK yordamida PCR tomonidan tasdiqlandi.

3.