O‘zbеkistоn rеspublikаsi

Строение клеток микроорганизмов
(цитохимические методы исследования)
Бактерия – сложная живая система, характеризующаяся высокой степенью упорядоченности составляющих ее структур. Каждая структура выполняет определенное жизненное назначение. Взаимодействие структур обеспечивает существование клетки , ее целостность.
Для изучения внутреннего строения клеток применяют специальные методы окраски. По форме клетки микроорганизмы не слишком разнообразны,
и в ряде случаев, чтобы установить принадлежность их к тому или иному роду и виду, необходимо провести специальное окрашивание той или иной структуры.
Окраска клеток микроорганизмов по Граму
Датский ученый Грам в 1884 г. предложил метод дифференциации клеток, основанный на различии в химическом составе клеточных оболочек. Сущность метода заключается в том, что в клетках одних видов микроорганизмов образуется нерастворимое в спирте соединение йода с основным красителем, у других видов это соединение появляется временно и после обработки спиртом растворяется. Первые микроорганизмы называются грамположительными, вторые - грамотрицательными.
Техника окраски по Грамму. На хорошо обезжиренное предметное стекло наносят 2 тонких мазка разных культур микроорганизмов (два из них – контрольные с заведомо известным отношением к окраске по Граму). Мазки высушивают на воздухе, фиксирует над пламенем горелки и окрашивают в течение 1 мин феноловым растворам генциана фиолетового (или кристаллического фиолетового), держа стекло в несколько наклонном положении. Препарат обрабатывают, непрерывно покачивая, 96% - ным спиртом в течение 15- 20 с. Время обесцвечивает очень существенно, при превышении определенного срока обесцвечиваются и грамположительные клетки, при недостаточном сроке обработки препарат окажется перекрашенным в дальнейшем.
Промыв препарат водой, его окрашивают фуксином Пфейфера в течение 1 мин. Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно- фиолетовый цвет, грамотрицательные - имеют только цвет дополнительной окраски (фуксина).
Результаты окраски по Граму зависят от возраста культуры. В старых культурах мертвые клетки всегда окрашиваются грамотрицательно.
В качестве объектов для окраски клеток микроорганизмов по Грамму рекомендуется дрожжи Bacillus mesentericus (грамположительные) и кишечная палочка Escherichia coli (грамотрицательная).