O‘zbеkistоn rеspublikаsi

Контрольные вопросы

1.Каким путем получают накопительные культуры?

2.По какому признаку судят о развитии бактерий?
3.Как можно выделить чистую культуру?
4.Как оценивается (проверяется) чистая культура?
5. Какие известны Вам методы хранения и поддержания культур?
6. Расскажете подробно о лиофилизации?
7.Как идет хранение в жидком азоте?
Практическая работа №9
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО УЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ


Цель работы: Ознакомить студентов с методами количественного учета микроорганизмов.
Метод серийных разведений.
Метод серийных разведений наиболее старый и трудоемкий. Однако он широко используется для учета жизнеспособных клеток как автотрофных, так и гетеротрофных микроорганизмов. Эти методы хорошо известны и приводятся в руководствах по микробиологии. Для получения предельных десятикратных разведений для учета хемолитоавтотрофных бактерий лучше использовать соответствующие питательные среды, а не воду, как это часто принято делать. На практике для расчета количества бактерий в 1 мл раствора или в 1 г руды пользуются таблицами, составленными на основе методов вариационной статистики. Точность подсчета наиболее вероятного числа клеток будет тем выше, чем больше пробирок каждого разведения засеяно (например, от 5 до 10). Однако, при массовых анализах проб, особенно в полевых условиях, обычно засевают по две пробирки из каждого разведения. Это позволяет определить число клеток бактерий с точностью до порядка, например, 10⁵, 10⁶ и т.д. Посевы инкубируют при оптимальной температуре. Время инкубации для каждой группы бактерий находят экспериментально. При количественном учете отдельных видов бактерий возникают определенные трудности, так как на одних и тех же средах могут расти различные виды бактерий, близкие по физиологическим признакам. Например, на одних и тех же средах растут Т. Ferrooxidans и L.Ferrooxidans или Т. Ferrooxidans , Т.Thiooxidans и Т.Acidophlus и др. Поэтому при оценке числа клеток того или иного вида бактерий необходимо их идентифицировать. Для этого просматривают в микроскопе пробы среды из последних разведений и инокулируют ими селективные среды.
Определение численности сульфатвосстанавливающих бактерий методом посева на селективные среды дает несколько заниженные результаты. Одной из причин является способность ряда сульфат восстанавливающих бактерий образовывать агрегаты, не распадающихся на отдельные клетки.
Более надежным способом выявления наличия в природных средах сульфат восстанавливающих бактерий является оценка интенсивности самого процесса сульфатредукции с использованием меченного ³⁵ SO^{2 -}₄