Правила проведения лабораторных исследований в области ветеринарии. Получение, транспортировка и подготовка патологического материала для вирусологических исследований

Мочу обрабатывают антибиотиками 500...1000 ЕД/мл и ис­пользуют для заражения.
При кожных высыпаниях исследуют содержимое папул, пу­зырьков и пустул, чешуйки и корки. Содержимое папул и пу­зырьков разводят раствором Хенкса в соотношении 1:5, а корки, чешуйки после растирания суспендируют в солевом растворе 1:5-1:10 и подвергают центрифугированию при 2000...3000 об/мин в течение 10... 15 мин. После обработки пени­циллином и стрептомицином (по 200...500 ЕД/мл) материал ис­пользуют для заражения.


Подготовка крови. Для выделения вируса может быть ис­пользована цельная дефибринированная, "лаковая" кровь или кровь с антиксагулянтом. В последнем случае берут 5 мл крови в пробирку с 5-6 каплями гепарина и замораживают. После оттаи­вания гемолизированную кровь центрифугируют при 2000...3000 об/мин в течение 15 мин, добавляют пенициллин и стрепто­мицин из расчета 100... 200 ЕД/мл и после проверки на стериль­ность используют для заражения. Для этих целей пригодна и свернувшаяся кровь. Ее растирают в ступке и добавляют неболь­шое количество раствора Хенкса (1:1 или 1:2), а далее поступают аналогично.
Для освобождения вируссодержащего материала от микро­организмов применяют стерилизующее фильтрование. Чаще все­го используют асбестовые пластинки, керамические свечи, коллодийные мембраны и стеклянные фильтры. Асбестовые фильтры готовят из прессованного асбеста в виде кружков диаметром 35, 140 и 350 мм. Выпускают фильтры марки "Ф" (фильтрующие), задерживающие взвешенные частицы, но пропускающие частично бактерии, и "СФ" (стерилизующие), задерживающие все виды бактерий, не пропускающие вирусы.
Коллодийные мембраны (ультрафильтры) готовят из нитро­клетчатки (коллодия) с точно калиброванными порами. Иногда их называют градоколовыми фильтрами (англ. graduate — калиб­ровать; кол — от слова коллодий). Широкое распространение по­лучили мембранные фильтры. Для фильтрования вирусов исполь­зуют фильтры с диаметром пор 100-400 нм. В настоящее время мембранные фильтры являются наиболее совершенными.
Керамические свечи представляют собой удлиненной формы полые цилиндры, закрытые в нижней части (свечи Шамберлена, Беркефельда, каолиновые фильтры Санкт-Петербургского кера­мического НИИ). Их изготовляют из каолина с различной степе­нью порозности.
Стеклянные фильтры готовят из пористого стекла. В по­следние годы довольно широкое распространение получили фильтры Шота с пластинкой №5 из сплавленных мельчайших гранул отекла.
Суспензии, содержащие вирус, перед фильтрованием необ­ходимо освободить от грубой взвеси. Для этого их вначале цен­трифугируют в течение 10...15 мин при 1500...2000 об/мин и фильтруют через бумажный фильтр большой порозности (800 нм). Суспензия, подлежащая стерилизующему (заключительному) фильтрованию, должна быть прозрачной и лишь слегка опалесцирующей. Жидкость, хранившуюся на холоде, перед фильтровани­ем рекомендуется в течение часа выдержать при комнатной тем­пературе, а затем нужный ее объем вылить в стакан фильтровального прибора. В приемном сосуде (колбе) создают разрежение при помощи водоструйного или масляного насоса. Фильтрат проверяют на стерильность (наличие бактерий, грибов) путем посева на МПА, МПБ, среду Сабуро.
Следует отметить, что фильтрование сопровождается ад­сорбцией вируса на фильтре и приводит к его значительным поте­рям.
Отбор крови для серологических исследований. Для сероло­гической диагностики необходимо иметь две пробы сыворотки крови (парные сыворотки), взятые в начале и в конце болезни. Первую пробу берут как можно раньше — в инкубационный пе­риод или в начале проявления клинических симптомов болезни, вторую — во время выздоровления или через 2...3 недели после заболевания. Брать кровь и готовить сыворотку необходимо сте­рильно, нельзя применять энтикоагулянты или консерванты, ко­торые могут придать сыворотке антикомплементарность, а в ре­акции нейтрализации оказать инактивирующее действие на вирус, оказаться токсичными для культур клеток или просто не­стерильными. Кровь в объеме 10... 15 мл берут в стерильные про­бирки с резиновыми пробками, выдерживают при комнатной тем­пературе до образования сгустка, обводят стеклянной палочкой или другим инструментом и переносят в холодильник при 4 °С на 18... 20 ч. После максимальной ретракции сгустка сыворотку от­сасывают, добавляют пенициллин и стрептомицин по 100 ЕД/мл, проводят высевы на бактериологические среды. Вместо отстаива­ния в холодильнике можно после обведения кровь центрифугиро­вать.
Серологические методы вирусологической диагностики тре­буют исследования парных проб сывороток, поэтому необходимо правильно сохранять первые пробы, пока не будут получены вто­рые. Хранить сыворотки необходимо в холодильнике при 4 °С или в замороженном виде, строго соблюдая порядок нумерации проб и соответствия записей в журнале и на пробах.