Учебное пособие для самостоятельной подготовки к экзамену по микробиологии, вирусологии и иммунологии

31. Простые и сложные методы окраски. Метод Грама и его значение.
Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель – водный фуксин, сафранин (окрашивание производят 1-2 мин), метиленовый синий (окрашивание производят 3-5 мин). После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе, при комнатной температуре, или осторожно промокая фильтровальной бумагой. На приготовленный препарат наносят 1 каплю иммерсионного масла и микроскопируют, используя иммерсионный объектив.
Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава, что позволяет выявить определенные структуры бактериальной клетки.
Окраска мазка по методу Грама. 1) окрасить фиксированный мазок генциан-виолетом (2 мин, через фильтровальную бумагу); 2) бумагу удалить, оставшуюся краску слить; 3) окрасить мазок раствором Люголя (1 мин); 4) раствор Люголя слить и нанести несколько капель чистого 96% спирта (на 30-40 секунд осторожно покачивая стеклом); 5) тщательно смыть спирт водой; 6) окрасить водным фуксином (2 мин); 7) промыть водой и высушить при помощи фильтровальной бумаги; 8) микроскопируют с иммерсией.
Все бактерии по отношению к окраске по Граму делятся на грамположительные – темно-фиолетового цвета и грамотрицательные – красного. Способность микроорганизмов окрашиваться в тот или иной цвет зависит от химического состава клеточной стенки. Грамположительные бактерии в клеточной стенке содержат многослойный пептидогликан, связанный с тейхоевыми кислотами, которые обусловливают прочную связь комплекса генциан фиолетового с йодом и резистентность к обесцвечиванию спиртом. У грамотрицательных такой комплекс не образуется и они чувствительны к обесцвечиванию спиртом.
32. Микрофлора полости рта, качественный и количественный состав, значение.
МИКРОФЛОРА ПОЛОСТИ РТА ЗДОРОВЫХ ЛИЦ

МИКРООРГАНИЗМЫ	%
Стрептококки	100
Лактобактерии	90,3
Стафилококки	40,7
Грибы рода Candida	25,7
Бактероиды	23,9
Коринебактерии	15,1
Нейссерии	7,9
Вейлонеллы	5,3
Лептотрихии	4,5
Фузобактерии	3,5
Микрококки	2,7

К облигатной флоре относится основная масса грамположительных кокков, которая представлена гетерогенной группой стрептококков. В эту группу входят Streptococcus salivarius, Str. sanquis, Str. mutans. Они отличаются друг от друга по способности ферментировать углеводы и образовывать перекись водорода. Сдвиг рН в кислую сторону приводит к декальцинации эмали. Важна также способность стрептококков синтезировать из сахарозы полисахариды. При этом глюкозная часть молекулы превращается в нерастворимый декстран, который способствует образованию зубных бляшек. Зеленящие стрептококки встречаются в полости рта в различных количественных соотношениях, которые зависят от диеты, гигиены полости рта, возраста и других факторов.
Грамотрицательные анаэробные кокки представлены родом Veilonella. Они достаточно хорошо разлагают лактат, пируват, ацетат и другие углеводы до углекислоты и воды. За счет катаболизма молочной кислоты, образуемой зеленящими стрептококками, вейлонеллы могут оказывать противокариозное действие.
Грамположительные палочки представлены в полости рта родом Lactobacillus. Они разлагают углеводы с образованием молочной кислоты, сохраняя жизнеспособность при низких значениях рН среды. Наиболее часто в полости рта здоровых лиц встречаются L. casei , L.acidophylius L.salivarius.
Грамотрицательные анаэробные и микроаэрофильные бактерии чаще всего относятся к семейству Bacteroidaceae. Они ферментируют сахара до газа, а пептоны - с образованием аминокислот. К данному семейству относятся три рода: Bacteroides, Fusobacterium, Leptotrichia .Наиболее часто встречаются B.melaninogenicus и B.gingivalis. . Они характеризуются низкой сахаролитической активностью, однако глюкозу разлагают с образованием смеси кислот, причем рН среды остается достаточно высоким. Данные виды являются постоянными обитателями десневых карманов. Наличие протеолитических ферментов у бактероидов имеет большое патогенетическое значение в развитии заболе¬ваний пародонта.
Род Fusobacterium представлен палочками веретенообразной формы. Они образуют из пептона или глюкозы молочную кислоту. Фузобактерии обитают в десневых карманах в ассоциациях со спирохетами.
Представители рода Leptotrichia (L.buccalis) имеет вид попарно расположенных зернистых палочек, часто нитевидной формы. Они не образуют индол и сероводород, ферментируют глюкозу с образованием большого количества молочной кислоты, что приводит к понижению рН среды до 4,5. При заболеваниях пародонта количество этих бактерий возрастает. Семейство Propionibacteriaceae включает в себя анаэробные бактерии, которые при разложении глюкозы образуют пропионовую и уксусную кислоты.
Из семейства Actinomycetaceae полости рта чаще всего встречаются роды Actinomyces и Bifidobacterium. Первые ферментируют углеводы с образованием кислых продуктов без выделения газа. Конечными продуктами расщепления глюкозы являются уксусная, молочная, муравьиная и янтарная кислоты. Обладают слабой протеолитической активностью. Актиномицеты находятся на слизистой оболочке рта, составляют строму зубного камня и входят в состав зубного налета. Наряду с этим, они содержатся в кариозных полостях зубов, в патологических десневых карманах, в протоках слюнных желез.