Universum: химия и биология

Материалы и методы исследования 
В различных округах республики, различающихся 
климатом, высотой над уровнем моря и относя-
щихся к различным географическим поясам, был 
произведен сбор 14 лекарственных растений.
Выделение темносептированных эндофитных 
грибов проводили по Hazalin с сотр. с модифика-
циями [5]. Поверхностной стерилизации подвергали 
части собранных растений с применением этанола и 
гипохлорита натрия, с различной длительностью 
экспозиции частей растений. После обработки дез-
инфектантами в течение 1–3 минут и промывки 
стерильной водой, каждый сегмент растения асепти-
чески измельчали на кусочки размером не более 
0,5 см и помещали на чашки Петри с картофельно-
декстрозным агаром, содержащие цефтриаксон в 
концентрации 200 мкг/мл для подавления роста 
бактериальной микрофлоры. Чашки инкубировали в 
течение 7–14 дней при температуре 28 °С. Последние 
промывные воды также засевали из расчета 100 мкл 
на чашку для контроля поверхностной стерилизации. 
Выросшие грибные изоляты пересевали на среду, 
не содержащую антибиотики. 
Родовую и видовую принадлежность выделенных 
изолятов грибов проводили классическими мето-
дами [1].
Культивирование выделенных эндофитов прово-
дили методом жидкофазной ферментации в условиях 
поверхностного (стационарно в термостате) или глу-
бинного выращивания (на качалке при 180 об/мин) 
на средах Чапека – Докса, Сабуро и картофельно-
декстрозном бульоне, при температуре 28 °С в тече-
ние 7–10 суток в колбах Эрленмейера объемом 1дм
3
. 
Питательную среду засевали мицелиальным ино-
кулюмом. Для получения мицелиального инокулюма 
колбы с 50 мл среды Чапека – Докса инокулировали 
суспензией 1×10
7
спор/мл и культивировали на 
качалке при 180 об/мин, температуре 28 °С в 
течение 3 суток. Посев мицелиальным инокулюмом 
осуществляли из расчета 5% инокулюма от объема 
среды культивирования. Выросшую биомассу культур 
отделяли центрифугированием при 6 тыс. об/мин и 
хранили при –40 °С.
Выделение меланинов проводили методом 
щелочной экстракции с последующим кислотным 
осаждением. Для этого 1 г биомассы промывали в 
дистиллированной воде, ресуспензировали в 0,5 Н 
NaOH и подвергали автоклавированию при 1 атм. 
15 минут. 
Образец после автоклавирования 
центрифугировали, отбирая супернатант, который 
подкисляли концентрированной HCl до выпадения 
хлопьевидного осадка от темно-бурого до черного 
цвета. Полученный осадок собирали центрифуги-
рованием, промывали в дистиллированной воде и 
ацетоне. Для определения сухого веса полученный 
осадок высушивали до постоянного веса при 
температуре 105 °С. 
Для проверки принадлежности выделенных 
пигментов к меланинам проводили три качествен-
ных теста на присутствие в их молекуле хиноидных 
и фенольных структур. Для проведения качественных 
реакций готовили 0,1%-ный раствор пигмента 
(15 мг пигмента растворяли в 15 мл 0,1 Н раствора 
NaOH).
Затем проводили следующие процедуры:
• 5 мл раствора пигмента переливали в пробирку 
вместимостью 10 мл и приливали 0,5 мл 10%-ной 
перекиси водорода. Положительная реакция – 
обесцвечивание раствора; 
• 5 мл раствора пигмента переливали в про-
бирку вместимостью 10 мл и приливали 0,1 мл 
0,1 М раствора KMnO
4
. Положительная реакция – 
раствор зеленеет; 
• 5 мл раствора пигмента переливали в пробирку 
вместимостью 10 мл и приливали 0,1 мл 5%-ного раст-
вора FeCl
3
. Положительная реакция – образуются 
крупные коричневые хлопья, в растворе с избытком 
хлорида железа осадок растворяется. 

---

№ 5 (107)
май, 2023 г.
34 
Для определения растворимости сухой пигмент 
растворяли в органических и неорганических раство-
рителях, таких как вода, ацетон, гексан, серная 
кислота [3; 11].