Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш Вирусларни ажратиб олишдаги 1-ишлар


Download 6.93 Kb.
Sana30.04.2023
Hajmi6.93 Kb.
#1417718
Bog'liq
вирусларнинг қисман тозаланган препаратини олиш

Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш

Вирусларни ажратиб олишдаги 1-ишлар

  • Фитопатоген вирусларнинг ҳозирда 35-45% ажратиб олинган ва уларнинг методлари ишлаб чиқилган.
  • 1898-йилда Бейеринк ТМВ ни тоза ҳолда ажратиб олган.

Босқичлари:

  • 1- босқичда ҳужайра элементлари ажратилади.
  • 2- босқичда вирусга ўхшаш моддалар ажратилади.
  • Кимёвий
  • этанол,
  • аммоний сулфат,
  • полиэтиленгликол
  • Физик-кимёвий
  • Аёвсиз
  • Иссиқлик
  • Совуқ
  • Беаёв
  • Гел хроматографияси
  • хроматографияси
  • Сентрафугалаш
  • Электрофорез

Методлари:

Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш

Ишдан мақсад.

Юқори ион кучига чидамли вирусларни аммоний

сульфати ёрдамида қисман тозалаш методи билан таништириш.

Керакли материаллар.

  • ТМВ билан касалланган тамаки барги (500 г);
  • 0,1М фосфат буфери, рН 7,0-7.5;
  • 0,1 н НС1;
  • 0,1 н NaOH;.
  • ЭДТА;
  • аммоний сульфат;
  • хлороформ;
  • вирус экстракциягида ишлатиладиган асбоб- ускуна ва идишлар.

Ишнинг бориши:


Вирус билан касалланган ўсимлик барги 1:1 нисбатдаги 0,1М ФБ (рН 7,5) билан гомогенизация қилинади.
1- босқич
касалланган ўсимлик барги
Фосфат буфери
2- босқич
Ишлов берилади
20%
аммоний
сулфат
3- босқич
30 минут давомида совутгичда тутилади
3 минг айл/тезлигида 20 минут давомида центрифуга қилинади.
Чўкма ости суюқлиги ташланади
Чўкма усти суюқлиги
25%
аммоний
сулфат
4- босқич
Шундан сўнг 60 минут кристаллар ҳосил бўлиши учун сақланади. Вирусли идиш вирус тўлиқ кристалланиши ва чўкиши учун кечасига совутгичда қолдирилиб кетилади.
сифон ёрдамида чўкма усти
суюқлиги ажратилади.
6 - 8 минг айланиш тезлигида 15- 20 минут центрифуга қилинади
5- босқич
ташланади
Чўкма усти суюқлиги
чўкма усти суюқлиги
чўкма ости суюқлиги
Кейинги босқичучун юборилади
чўкма ости суюқлиги
100мл 0,01М фосфат буферига, рН 7,5 эритилади.
6- босқич
7- босқич
Диализ қопчасига вирусли суспензияни солингандан сўнг уни 3- 5 литрли сув ёки буфер эритмаси тўлатилган идишга тушириб қўйилади. Сувли идиш магнитли айлантиргичга ўрнатилади. Диализ 24 соат давомида олиб борилиб, шу даврда 3 марта диализ суви (буфер) алмаштирилади.
8- босқич
препарат 10 минут 15-18 минг айл/тезлигида центрифуга
қилинади
чўкма усти суюқлиги ташланади
чўкма усти суюқлиги 9-босқичга юборилади
9- босқич
чўкма усти суюқлиги чўктирилади
25%
аммоний
сулфат
20-30 минутдан сўнг 20 минут давомида 6минг айл/тезлигида центрифуга қилинади.
диализат
сентрафугат
ташланади
Филтр қоғозда қуритилади
10- босқич
11- босқич
Вирусли чўкма
Вирусли чўкма
чўкмани 20 мл 0,01М фосфат буферида (рН 7,0- 7,5) эритилади
15-18 минг айланиш тезлигида центрифуга қилиниб, эримаган қисмидан ажратиб ташланади.
Download 6.93 Kb.

Do'stlaringiz bilan baham:




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling