ÇALIŞMA PRENSİBİ; ÇALIŞMA PRENSİBİ; Fluoresanlanmış (FITC ile) M Ab ile işaretlenmiş hücreler Sıvı bir ortamda sıra halinde uyarıcı ışıktan (Argon lazer) 488nm’de geçirilirler - Uyarıcı ışığı
- Hücreler kırarlar veya
- Florokromla işaretlenmiş m Ab’lerin bağlandığı hücre tarafından emilir ve yayılır
- Bu yayılan ışığın şiddetini ve niteliğini algılayan dedektörler bilgisayara aktarırlar
- Buna göre;
- ♣ Hücrenin tipi ve sayısı belirlenir
- Lökosit fenotiplemesi (EN SIK)
- Konjenital veya kazanılmış immun yetersizlik tanısı (en sık AIDS)
- HIV pozitifliğinde prognoz değerlendirilmesi
- İmmun yetersiz hastalarda immuniteyi yada kemoterapi monitörizasyonu
- KİT yapılan hastalarda yeni immun durumun takibi
- Tümör hücre fenotiplemesi
- Lösemi ve lenfoma tanı ve sınıflaması
- B lenfositlerinde klonal tayini ve lenfoma ve lösemi ayırımında
- Hücre içi antijenlerin (myeloperoksidaz miktarı) tayini
- Hematopoetik hücrelerin (CD4)
- Hematopoetik olmayan
- Tümörler ve hücrelerden ayırt edilmesi
DNA analizi - Anöploidi tayini
- Hücre siklüsu kinetiğinin belirlenmesi
Nötrofil fonksiyon analizleri - O2’nin oluşumunun tayini ile;
- Granulomatoz hastalık tayini
Diğer kullanım alanları - Retikülosit sayımı
- Transplant hastalarında Cross-Match
- Sitogenetik
ENFEKSİYON HASTALIKLARINDA ENFEKSİYON HASTALIKLARINDA - Mikroorganizma- hedef hücre ilişkisi;
- Apoptozisin incelenmesi
- HIV ile enfekte kişilerde
- ♣ Monunükleer hücrelerinde apoptosis oranları
- CD8 T ve
- CD19 B hücrelerinde en sıktır
- Konak hücreye ait proteinlerdeki değişimler
- EBV ile enfekte B lenfositlerinde;
- HIV ile enfekte T lenfositlerinde;
- CMV ile fibroblastlarda;
- ♣ MHC I ekpresyonu
- Mikroorganizmanın hücreye bağlanmasının incelenebilmesi
- EBV’nin
- ♣ B lenfositlerine
- ♣ Epitel hücrelerine
- CR2 reseptörüne
- Poliovirus
- ♣ MNH CD14 reseptörlerinde
- Kızamık virusu
- ♣ Hedef hücrelerin CD46 reseptöründe
- Hücre içi ve yüzeyi mikroorganizma antijenlerini inceleme
- VZV ile enfekte hücre yüzeyinde
- ♣ gp1
- HIV ile enfekte CD4 T lenfositlerinde
- ♣ gp 160/120
- İnfluenzae ile enfekte hücrelerde
- ♣ HA antijenileri
- Klinik virolojide kullanılmaktadır
- Enfekte kişilerin hücrelerinden
- Virusle enfekte olanları süratle belirler
- ♣ CMV ile enfekte MNH’ler kantitatif olarak
- ♣ HIV seropozitif kişilerde
- MNH’ lerde kantitatif Ag tayini Böylelikle;
- *Antiviral tedavinin izlemi
- Spesifik antikor tayini
- CMV, HSV, HIV gibi viruslara
- H. pylori gibi bakterilere
- T.gondii gibi parazitlere karşı
- Gelişen spesifik Ab’ler ölçülebilir
a) Lenfosit izolasyonu a) Lenfosit izolasyonu Dansite- Gradient Santrifüj Yöntemi - Kan hücre grupları birbirinden farklı dansite özelliğine sahiptir
- 3 ml ficol-isopak (Dansite 1077 gr/lt) konur
- 3 ml heparinli periferik kan konur
- 1500 devirde, 45 dakika santrifüj edilir
- Lenfositler orta tabakada yoğunlaşırlar
- En altta eritrosit ve granülositler
- ♣ Dansiteleri 1077 ‘den fazla
- En üstte buff-coat toplanır
- ♣ Dansiteleri 1077’den düşük
- ♣ Buff- Coat’dan
- Trombositler (santrifüj)
- Monositler petri kabında tutularak uzaklaştırılır
b) Lenfosit ayırımı b) Lenfosit ayırımı T lenfosit ayırımı - Rozet testi
- Koyun eritrositlerine karşı CD2 reseptörü vardır
- Periferik kanda E-Rozet yapan
- %65-70 T lenfosit vardır
- B lenfositi E-Rozet yapmaz
B lenfosit ayırımı - Direkt immun fluoresan yöntemi
- Fluoresanlanmış (FITC) anti- Ig Ab ile yapılır
- Toplam lenfositlerin %20-25’i B lenfositleridir
Periferik kandaki - T ve B lenfosit oranını saptamak
- İmmun yetmezlik hastalıklarının tanısında
- Lenfosit lösemi ve lenfomadaki lenfosit tipinin tayininde
- Otoimmun hastalıklar ve kanserli olgularda hücresel immun yanıtın değerlendirilmesinde kullanılır
Do'stlaringiz bilan baham:
|