Oqsil konsentratsiyasini aniqlash Proteinni aniqlash uchun ishlatiladigan usullari

Oqsil konsentratsiyasini aniqlash

Proteinni aniqlash uchun ishlatiladigan usullari.

• Biuret sinovi.
• Folin-Ciocalteu (Lowry) tahlil.
• Bitsinonin kislotasi (BCA) tahlil qilish.
• Bo'yoq bilan bog'lash (Bredford) tahlil.
• Ultraviyole yutilish.

Oqsil konsentratsiyasi

• Rang tahlili.

Lower (biologiyada eng ko'p keltirilgan havola)

• Lowry modifikatsiya: yuqori sezgirlik va mustahkamlik.

BCA.

• Bo'yoqlar Amaxsi 465 nm dan 595 nm ga o'zgartiradi.

Bredford.

• Ichki assimilyatsiya.
• Aromatik aminokislotalarga tayanadi.

A280.

Oqsillarda qanday xromoforik guruhlar mavjud?

A) Peptid aloqalarida quyidagi o'tish kuzatiladi:

1) n -> p * 210-220 nm da, rishtalarning bo'lmagan darajalaridan n antitratlar darajalarigacha p *

2) p -> p * 190-210 nm oralig'ida, p darajasidan p-zanjirga qarshi p darajasiga qadar

3) n -> s * 175 nm da, zaryadsiz darajadan n, antitrest darajalariga qadar s *

B) Yon zanjirlarda:

Peptid aloqasi uchun umumiy bo'lgan va shuning uchun unchalik kuzatib bo'lmaydigan o'tishlardan tashqari, xushbo'y guruhlar (260-280 nm), Trp, Tir, Phe esga olinishi kerak.

C) Protez guruhlari

A280

• Ichki assimilyatsiya usulidan foydalanadi.
• Aromatik qoldiqlarni aniqlaydi.
• Rezonansli aloqalar.
• Oqsil tarkibi, tug'ma holati va AA tarkibiga bog'liq.

Warburg-Kristian usuli

• Ushbu usul nuklein kislotalarning ifloslanishini tuzatish uchun ishlab chiqilgan to'g'ridan-to'g'ri spektrofotometrik usul bo'lib, oqsil tufayli faqat yutilishni qoldiradi.
• 280 nm va 260 nm da assimilyatsiya o'lchovlari nuklein kislotasi kontsentratsiyasini tuzatish uchun ham qo'llaniladi.

Absorbsiya o'qish 280 nm.

• afzalliklari: tezkor, buzilmas.
• Kamchiliklari: miqdoriy emas, chunki usul aromatik aminokislotalarni singdirishga asoslangan; molyar yo'qolish koeffitsientlari shuning uchun oqsildan oqsilgacha juda farq qiladi va shuning uchun standartni tanlash juda qiyin. Shuningdek, nuklein kislotalarning kuchli aralashuvi mavjud.
• sezuvchanlik: 0,2-2 mg / ml (yomon)
• Nuklein kislotalarni tuzatish:
•   Xroteinlar (mg / ml) = 1,5 x A280- 0,75 x A260
• Vaqt: bir necha daqiqa

Ultrabinafsha Absorbsiyalash. Hisoblash tartibi

• Suvga nol spektrofotometr (yoki bufer)
• Absorbsiyani kvarts kyuvetasida 280 nm ga oling
• Suv (yoki bufer) yordamida to'lqin uzunligini 260 nm va nolga o'zgartiring
• Kvarts kyuvetasida 260 nm tezlikda so'riladi
• Oqsil konsentratsiyasini hisoblash uchun quyidagi tenglamadan foydalaning:
•                                 [Protein] (mg / ml) = 1,5 * A280 - 0.75 * A260