1 Источники получения ферментных препаратов. Классификация и номенклатура ферментов и ферментных препаратов. Характеристика активности ферментных препаратов

9 Выделение и очистка ферментов. Осаждение ферментов органическими растворителями. Осаждение ферментов высококонцентрированными растворами солей
Культура микроорганизмов, выращенная поверхностным способом, и культуральная жидкость после глубинного культивирования содержат большое количество балластных веществ. Выделение и очистка ферментов трудоемкий и дорогостоящий процесс, поэтому, если ферментный препарат можно использовать в виде неочищенной культуры микроорганизмов, его очистку не проводят, например, спиртовая, кожевенная промышленности, в с/х при получении кормов.
Осаждение ферментов органическими растворителями. Эффект осаждения белков связан с тем, что в присутствии органического растворителя снижается активность воды. Происходит вытеснение молекул воды с поверхности белковой молекулы. Молекулы воды, расположенные на гидрофобных участках поверхности белка, могут быть замещены на молекулы органического растворителя. При этом растворимость белков падает, происходят агрегирование и осаждение белковых молекул.
Факторы, влияющие на осаждение ферментов.
1.Размер молекулы белка. Крупные молекулы агрегируют быстрее, чем мелкие. Наиболее широко для осаждения ферментов используются этиловый спирт, ацетон и изопропиловый спирт.
2.Наличие в растворе некоторых ионов Ме может оказывать стабилизирующее влияние на фермент. Так, ионы Са²⁺ способствуют сохранению активности α-амилаз, протеиназ, глюкоамилаз; защитным действием обладают ионы магния, марганца, кобальта. В то же время ряд нонов (Ее²⁺ , Рb²⁺ , Сu²⁺, Аl³⁺, Ni²⁺, Аg⁺ и др.) действует отрицательно и их присутствие крайне нежелательно. Наличие электролитов часто позволяет снизить расход осадителя и улучшить структуру осадка.
3.Температура ферментного раствора и растворителя при осаждении д.б низкой, т.к. смешивание спирта и водного раствора сопровождается повышением температуры раствора и может произойти инактиваця.
Оптимальная температура осаждения 3-5 °С для большинства м\о. Для этого ферментный раствор охлаждают до 1-3°С , а растворитель до -8 - -12°С.
4.рН среды. Наиболее полно ферменты выпадают в изоэлектрической точке, когда создаются благоприятные условия для агрегирования белковых молекул. Использование органических осадителей при рН, близком к изоэлектрической точке, позволяет ускорить осаждение ферментов и использовать растворители более низких концентраций.