Dnk konsentratsiyasini aniqlash

DNK konsentratsiyasini aniqlash

Spektrofotometrik usulda aniqlanishi mumkin bo'lgan DNK kontsentratsiyasining pastki chegarasi 0,1 mkg / ml ni tashkil qiladi. Belgilash uchun odatda sinovdan o'tgan DNK eritmasining alikvotini (lotincha aliquoties - bir nechta qismlar, ko'paytma) oling, masalan, 1 mkL va 100 va undan ko'p marta suyultiriladi.

Keyin eritma konsentratsiyasining olingan qiymati qayta hisoblanadi. Suyultirilgan namunada 10 ng dan ortiq DNK bo'lishi muhim ahamiyatga ega. Taqqoslash uchun kamida 10 ng DNKni o'z ichiga olgan lentani gel elektroforezi bilan ham ko'rish mumkin. DNK namunasida RNK bo'lmasligi kerak.

Kerakli jihoz va reaktivlar

Konsentratsiyasi noma'lum bo'lgan bakteriyalar, qon hujayralari yoki makkajo'xori to'qimalaridan genomik DNK, spektrofotometr, istalgan kelib chiqishi DNK namunasi.

- TE buferidagi noma'lum konsentratsiyali DNK eritmasi.

- 1 mg / ml konsentratsiyasida TE buferidagi lambda fag DNK eritmasi.

Ishning bajarilishi

1. Olingan DNK namunasini mikropipetka bilan tahlil qilish uchun oling va preparatni 100 mM NaCl o'z ichiga olgan 130 ul TE bufer qo'shib suyultiring. Suyuq sirt egriligi o'lchovlarga ta'sir qilmasligi uchun namuna hajmi 130 ll ga teng bo'ladi.

2. Suyultirilgan DNK namunasini "kichik" (100 ul) quduqqa joylashtiring.

3. A260 ning yutilishini o'lchash. Olingan qiymat 0,005-2,5 oralig'ida bo'lishi kerak. Aks holda, DNK suyultirilishi yoki konsentratsiyalangan bo'lishi kerak.

4. Jadvaldan konversiya faktoridan foydalanib DNK kontsentratsiyasini hisoblang. 1 formula bo'yicha: C [mg / ml] = A260 K.

DNK va RNK konsentratsiyasini hisoblash

	K [мкг/мл]	K1:130 [мкг/мкл]
DNK qo’sh zanjirli	50	6,5
DNK bir zanjirli	37	4,81
RNK	40	5,2

5. DNKning oqsillar va polisaxaridlar aralashmalaridan tozalanish darajasini baholash uchun A280 va A235 singishini o'lchash. 260/280 va 260/235 nisbati 1,8 dan katta bo'lishi kerak. Sof DNK uchun A260 / A280 = 1.8-1.9 va A260 / A235 = 2.2-2.5 qiymatlari xarakterlidir. Sof RNK uchun A260 / A280 qiymati = 1,9-2,0 d.

6. MOLBIOL.RU veb-saytining asosiy sahifasini oching (http://www.molbiol.ru). Asosiy sahifada "Hisob-kitoblar" bo'limini toping, "DNK (RNK) konsentratsiyasini spektrofotometrik aniqlash" bandini tanlang va maxsus shakl yordamida namunangiz konsentratsiyasini hisoblang.