Dnk. Strukturasi va funksiyasi

3. DNKni olish usullari

DNKni ajratib olish texnikasi foydalaniladigan manbaning (hayvon yoki o'simlik to'qimalari, mikroorganizmlar, viruslar) tarkibi va tabiatiga bog'liq. DNKni laboratoriya va sanoat ishlab chiqarish uchun odatda buzoqning timus bezi, shuningdek, baliqlarning spermatozoidlari (sutlari), sutemizuvchilarning taloqlari va qushlarning yadro eritrotsitlari ishlatiladi.

Odatda DNKning natriy tuzi sifatida olinadigan DNK preparatlari oq tolalar ko'rinishida ko'rinadi. DNKning tabiiy xususiyatlarini saqlab qolish uchun to'qimalar va hujayralarni qayta ishlash, qoida tariqasida, to'qimalarda mavjud bo'lgan va fermentativ jarayonlarni keltirib chiqaradigan dezoksiribonukleazalarning ta'sirini istisno qiladigan yoki kamaytiradigan sharoitlarda imkon qadar tezroq sovuqda amalga oshiriladi. DNKning degradatsiyasi. Mahalliy xususiyatlarni saqlab qolishdan tashqari, eng muhim vazifa DNKni boshqa moddalardan, birinchi navbatda, oqsillar va RNKdan tozalashdir. Shu munosabat bilan DNKni olish usullari, asosan, preparatlarni RNK aralashmalaridan proteinsizlantirish va tozalash usullarida farqlanadi. Ushbu maqsadlar uchun hujayralar va to'qimalar turli xil yuvish vositalari, fenollar va boshqa deproteinizatsiya qiluvchi vositalar bilan davolanadi.
Hayvon va o'simlik to'qimalaridan DNK olishda, ko'pincha hujayra yadrolarining bir qismi oldindan ajratiladi yoki dezoksiribonukleoproteinlar fiziologik konsentratsiyalarda EDTA yoki ikki valentli kationlarni bog'laydigan boshqa birikmalar mavjudligida ularni fiziologik konsentratsiyalarda sho'r eritmalar bilan yuvish orqali ajratiladi. deoksiribonukleazalarning fermentativ faolligi. Proteinlarning asosiy qismini olib tashlaganingizdan so'ng, preparatlar qo'shimcha ravishda oktanol yoki fenol bilan xloroform bilan proteinsizlanadi. Ko'pincha ular ribonukleazlar va proteolitik fermentlar bilan ham davolanadi.
Bakteriyalardan DNK olish uchun odatda Marmur usuli qo'llaniladi. Bakterial massani 0,015 M natriy sitratli 0,15 M Nad bilan yuvish, EDTA va 2% natriy dodesil sulfat bo'lgan 0,15 M NaCl da 60 ° C haroratda hujayra lizisini va pH 8,0, alkogolli alkogol, izopretsilin bilan deprotepnizatsiya, izopretsipil bilan deprotepnatsiya qilish, takroriy ko'p deproteinizatsiya, ribonukleaza bilan davolash va izopropil spirti bilan cho'ktirish. Ushbu usul turli xil modifikatsiyalarda, shuningdek, mitoxondriya kabi hayvonlar va o'simliklar to'qimalaridan va izolyatsiya qilingan hujayra tuzilmalaridan DNK olish uchun muvaffaqiyatli qo'llaniladi.