Ферментати

Посуда и оборудование

3 колб Эрленмейера (150мл)

9 колб Эрленмейера (50мл)

1 бюретка (50мл)

3 мерные пипетки (10 мл)

1 пипеточный шарик

20 Пипетка Пастера (пластиковая)

1 водяная баня

1 бутыль для отходов (1 л) с маркировкой WASTE

Перед началом работы необходимо создать следующие условия:

Раствор формальдегида и фенолфталеина, pH 7,0, должен быть свежо приготовлен

1. Надо приготовить 100 мл раствора формальдегида (10% масс./об.), разбавив 36% исходного раствор формальдегида с деионизированной водой.
2. После этого, добавить 1 мл 0,2% раствора фенолфталеина в этаноле в 10% раствор формальдегида.
3. А потом мы должны титровать раствор с 0,1 моль л–1 NaOH. Конечная точка указывается как первая видимая изменение цвета смеси на светло-розовый.
4. А теперь надо наливать раствор (100 мл) в стеклянную бутылку с надписью «Формальдегид-фенолфталеин» раствор, рН 7,0”.

Процедура эксперимента

I. Каталитический гидролиз казеина трипсином.

1. Возьмите 3 колбы Эрленмейера (50 мл) и добавьте 5 мл раствора формальдегида, фенола и фталеина.

в каждую колбу. Пометьте колбы цифрами от 1 до 3 (колба 1-3).

2. Возьмите 1 колбу Эрленмейера (150 мл) и добавьте в нее 50 мл раствора казеина (А). Держать

колбу на водяной бане (37 С) в течение 10 мин.

3. Одновременно с этапом 2 поместите флакон с TYP на водяную баню (37 C) и инкубируйте в течение

10 минут.

4. Перенесите 5 мл раствора TYP в колбу с казеином (А). Хорошо перемешайте и запустите таймер.

5. Перенесите 10 мл реакционной смеси в колбы на 50 мл, обозначенные цифрами 1, 2 и 3 (колбы 1-3).

через 2 мин, 4 мин и 6 мин соответственно.

6. Повторите шаги 1–5, чтобы завершить эксперименты с растворами казеина B и C.

II. Определение концентрации аминокислот после гидролиза формальдегидным титрованием

7. Добавьте по 10 капель раствора фенолфталеина в этаноле в каждую из колб Эрленмейера на 50 мл.



содержащие образцы.

8. Оттитровать смесь в колбах Эрленмейера на 50 мл 0,1 моль л–1 NaOH. Конечная точка

указывается как первое видимое изменение цвета смеси на светло-розовый. Запишите объем (мл)

потребленного NaOH в следующей таблице

9.Перелейте все растворы в колбах Эрленмейера (50 мл и 150 мл) в бутыль с маркировкой

ОТХОДЫ

мы должны последовательно следовать приведенным выше инструкциям на протяжении всего эксперимента

В качестве результаты эксперимента 1. мы сможем определить концентрацию аминокислот для каждого раствора (А, В, С) и заполнить представленный таблицу ниже

2. Из эти значении можно рассчитать начальную скорость реакции (v10, v20, v30) ферментативного гидролиза белка с путем построения графика зависимости концентрации аминокислот от времени в соответствии с данными, приведенными в приведенной выше таблице.

Графики будет выглядеть примерно так:

3. Окончательно, теперь мы сможем построить график зависимости 1/V от 1/S, с этого можно определить Vmax и Км. Также график будеть линейном.


Смысл который лежит в основе эксперимента является изучать одним из ферментативный механизмы который проводит внутри организма

Список литературы :

1. Подготовительные задачи к 54-Международной Химической Олимпиаде 2. Здановский А.Б. Галлургия. –Л.: Химия, 1972. –С.572
3. Kлайден ,,Органическая Химия” 4. Биохимия С.Е.Северин