Fizikaviy metod

2.1 Fizikaviy metod
Ushbu metod orqali kurkuminning suvda eruvchanligini laborotoriya sinovlari orqali aniqlandi. Buning uchun kurkuminning 15 gr kukunidan foydalanildi. 100 ml suv erituvchi sifatida qo’llanildi. Jarayonni turli hil konsentratsiyalarda va haroratni o’zgartirish orqali eruvchanlik koifisentini aniqlandi. Labororatoriya tekshiruvlari manit meshalka orqali 20-100° C oralig’ida amalga oshirildi. Erituvchi muhiti ph ni turli hil ishqor va kislotalar yordamida o’zgartirib turuldi.
2.2 Kimyoviy metod
Kurkuminning kimyoviy hossalari hamda tarkib tuzulishi asosdia uning kimyoviy reaksiyalarga kirishish qobilyati tekshirildi. Bunda kurkumin va organic moddalarning galogenli hosilalaridan metil xlorid bilan o’zaro reaksiya amalga oshirildi. Kurkumin tarkibidagi OH guruppalarining reaksiyaga kirishuvchanligi aniqlandi.
2.3 Suyuqlik xromotografiya metodi.
Suyuqlik xromotografiya usulida kurkumin va qo’shimcha birikmalarni bir biridan ajrtatish amalga oshirildi. Ekstrksiya usulida olingan kurkumin va qo’shimcha hosil bo’lgan mahsulotlar bir biridan ajratish uchun kurkuminning yuqori gidrofoblik hususiyati asos qilib olindi va hosil bo’lgan mahsulotlarning 6 mg namunasida tadqiqot amalga oshirildi.

Olingan natijalar

3.1 Kurkuminning fizik hossalari asosida uning erituvchilar eruvchanligi tekshirish uchun 15 gr bo’lgan kurkumin kukuni 100 ml erituvchi suvda hona haroratida eritildi. Dastlab erituvchi tasirida yomon eridi va sekin astalik bilan qizdirildi qizdirish natijasida eruvchanlik ortib bordi. Eng yaxshi erish oralig’i 85-90° C oralig’ida kuzatildi. Eritma sovutilgach eritmanish pastki qismiga kurkumin kiristallari hosil bo’lib cho’kmaga tushdi. Jarayonni ph holatini KOH ning 1N li eritmasidan qo’shish orqali tushurganimizda eruvchanlik kamaya bordi va kurkuminning Kristal cho’kma hosil qilishi ortdi. Eritmaning muhitini kislotali muhitga o’zgartirishimiz kurkumin eruvchanligiga ijobiy tasir ko’rsatdi va eritma to’liq hosil bo’ldi va kiristallar yo’qoldi. Ushbu ko’rsatkichlardan foydalanib kurkuminning eruvchanlik hossalari eritmaning ph >7 bo’lishi bilan ortib boradi, aksincha ph<7 kichiklashi bilan kamayishi isbotlandi.
3.2 Kimyoviy hosil bo’lish qoidalari va reaksiyalarni amalga oshirish orqali kurkuminning kimyoviy reaksiyalarga kirishish qobilyatlari o’rganildi. Buning uchun kurkumin va metilxlorid ning o’zaro tasirlashuv reaksiyasi amalga oshirildi. Metilxloridning 1 M li spirtdagi eritmasiga 1mol kurkumin 95% dan qo’shildi jarayon reaktorda 130-140° C oralig’ida 2 soat davomida amalga oshirildi . Reaktordan hosil bo’lgan gazlarni sovutgich orqali o’tkazildi va metiloranjiviyning 0.5% li suvli eritmasiga trubka orqali botirib qo’yildi. Kimyoviy reaksiyaga kirishganda kurkumin tarkibidagi OH guruhi reaksiya kirishuvchanligi aniqlandi. Yani metilxlorid tarkibidagi xlor ioni OH guruhi bilan o’rin almashi va reaksiya mahsuloti sifatida metil spirt hosil bo’ldi. Reaktorning yuqori qismidan chiqayotga metil spirt bug’lari Libix sovutgichi orqali o’tdi va kondensatsiyalandi. Kondensat esa metiloranjeviyning eritmasiga tushganida indicator rangi siyoh ranga aylandi.

2.1 Физический метод

С помощью этого метода растворимость куркумина в воде определяли с помощью лабораторных тестов. Для этого использовалось 15 граммов порошка куркумы. В качестве растворителя использовали 100 мл воды. Коэффициент растворимости определяли, контролируя процесс при различных концентрациях и температурах. Персонал лаборатории. маннита проводили в интервале 20-100°С. рН растворяющей среды изменяли с помощью различных щелочей и кислот.
2.2 Химический метод
Свойства и структура куркумина были исследованы на основе его способности реагировать со своим составом. Куркумин и галогенпроизводные органической нагрузки реагировали с метилхлоридом. Определена реакционная способность ОН-групп куркумина.
2.3 Метод жидкостной хроматографии.
Куркумин и дополнительные соединения отделяли друг от друга с помощью жидкостной хроматографии. Экстрагированный куркумин и побочный продукт отделяли друг от друга по высокой гидрофобности куркумина в отношении основания и исследовали образец продукта массой 6 мг.
Полученные результаты
3.1 Основываясь на физических свойствах куркумина, 15 г порошка куркумина растворяли в 100 мл водного растворителя при комнатной температуре, чтобы проверить его растворимость в растворителе. Первоначально он плохо растворялся в растворителе и медленно нагревался, увеличивая растворимость в результате нагревания. Наилучший диапазон плавления наблюдался в диапазоне 85-90°С. После охлаждения раствора образовались кристаллы куркумина, которые оседали на дно раствора. Когда мы понизили рН процесса, добавив 1 н. раствор КОН, растворимость уменьшилась, а образование кристаллического осадка куркумина увеличилось. Смена среды раствора на кислую положительно повлияла на растворимость куркумина, раствор полностью образовался и кристаллы исчезли. С помощью этих показателей было доказано, что растворяющие свойства куркумина увеличиваются при рН раствора >7 и, наоборот, снижаются при снижении рН<7.
3.2 Способность куркумина вступать в химические реакции изучалась путем проведения химических закономерностей образования и реакций. Для этого была проведена реакция взаимодействия куркумина и хлористого метила. К раствору метилхлорида в 1 М спирте добавляли 1 моль куркумина 96% Процесс проводили в реакторе при 135-145°С в течение 2 часов. Образовавшиеся из реактора газы пропускали через охладитель и через трубку погружали в 0,5%-ный водный раствор метилового оранжевого. Было обнаружено, что группа ОН в куркумине является реакционноспособной при химической реакции. То есть ион хлора, содержащийся в хлористом метиле, обменивался на группу ОН и в качестве продукта реакции образовывался метиловый спирт. Из верхней части реактора пары метилового спирта проходили через охладитель «Либикс» и конденсировались. А при попадании конденсата в раствор метилового оранжевого цвет индикатора становится черным.
Выращивание куркумина в лабораторных условиях.
Поверхностные стерилизованные боковые побеги срезают консервированный из выращенных в поле корневищ куркумы привиты асептически в нашей лаборатории Стерилизованная твердая среда МС (pH 5,9), содержащая 0,85% агар и 3,1% сахарозы и инкубируют при 25°С.
Фотопериод 16 часов света/8 часов темноты. Примерно через 4 недели, побеги, отходящие от побегов, были перенесены асептически новые МС, выращенные на твердой среде и под ней те же условия в течение примерно 10 недель. после перевода в новую среду и еще 10 недель культивирования, развившиеся листья и листовые влагалища удаляют и у основания образуются укореняющиеся микроризомы листовое влагалище пересаживают на новую среду. При появлении большого количества побегов из боковых побегов в микрокорневищах превратились в двулистные растения новые растения были выделены из микроризом и перенесены отдельно в новую среду для новой
используется в цикле воспроизводства или кормления эксперименты, описанные ниже. Для анализа накопления DMC и куркумина корневища культурных растений, двулистные растения высаживали на твердую среду МС (рН 5,9), содержащую 0,8% агара и 7% сахарозы. Через 4 недели культивирования растения переносили на жидкую среду МС (pH 5,9), содержащих 8% сахарозы и выращенных на переносить на свежую среду каждые 4 недели. Вся культура условия: 25°С и 16-часовой фотопериод. Приготовление указанных прекурсоров. Коричный кислоту готовили по методу Denniff et al.5) для синтез дигидроферуловой кислоты. к пиридину
Раствор (7 мл), содержащий малоновую кислоту (12). ммоль) и бензальдегид (25 ммоль) анилина. (350 мл). Реакция после стояния при 60°С в течение 18 часов Смесь разбавляют до 100 мл дистиллированной водой.
рН раствора доводили до 10 с помощью 2 н. NaOH и Промыть EtOAc (5 000 мл). Из разделенных водный слой, кристаллизованный коричной кислотой Добавление 5 N-HCl (около 10 мл). Коричные кристаллы кислоту промывали дистиллированной водой и сушили вымораживанием. Точно так же п-кумаровая кислота и ферул кислоту получали с использованием п-гидроксибензальдегида и ванилин соответственно вместо бензальдегида.
Из меченых предшественников фенилпропаноидов, 14 Cмеченых циннамоил-КоА, п-кумароил-КоА и ферулоил КоА был синтезирован через сложные эфиры N-гидроксисукцинимида. С модификацией метода Стокигта и Ценка, 8) и очищены по методу Бейерле и Пичерского.9) уксусная кислота, уксусная кислота . Малоновую кислоту растворяли в дистиллированной воде. растворы 833 мМ. Этированная корица, п-кумар, и феруловые кислоты ДМСО (0,5 ммоль 1,7 мл) и разбавляют до 10 мл дистиллированной водой чтобы сделать конечную концентрацию 52 мМ. Это решения pH доводили до 5,9 с помощью KOH. Фенилаланин и меченый циннамоил, п-кумароил, и ферулоил-КоА, растворенные в дистиллированной воде. Подготовьте растворы 55 мМ. Тирозин и фенилаланин (для сравнения) растворен в жидкой среде MS (рН 5,8) Содержит 8% сахарозы до конечной концентрации 1,5 мМ. Все растворы стерилизовали пропусканием через мембранный фильтр 0,23 мм.

Наша культура представлена ​​на рис. 4 и 5 (для Подробнее см. в разделе «Материалы и методы»). Чтобы получить растение материалы физиологически и генетически близки как можно больше выращенных в поле растений, мы использовали в качестве закваски не проходя культурный материал стрельбы из трех почтительный процесс и избегать любого использования экзогенные регуляторы роста растений на всех этапах культурная система. Сроки распространения, установленные выполнением использование нескольких боковых побегов в микрокорневищах возможна постоянная поставка достаточного количества растений материалы в синхронизированной фазе роста без использования регуляторы роста растений. Согласно Сиригуркару, 10) высокая концентрация сахарозы в среде (6-9%) набухание микроризом. Накопление визуализируются куркуминоиды в набухших микроризомах. одобренный. Определение подходящего времени для введения меченых предшественников мы проанализировали на DMC собранные с интервалами в набухших микроризомах (Рисунок 6). На основании полученных данных мы решили управлять Наклейте пионеры для растений в конце 6-недельного возраста прекультура (4 недели в твердой среде, содержащей 6% сахарозы и следующие 2 недели в жидкой среде 8% сахарозы), когда ДМК в микроризоме стали значительно увеличиваться (рис. 4в). Затем 5 или 11 d (для предшественников, растворенных в среде). инкубация с каждым 13C-меченым предшественником (рис. 4d),мы смогли получить сильно обогащенный 13C DMC (около 0,2 мг из 10-15 обработанных растений) для ЯМР анализ, раскрывающий детали (рис. 4e). на биосинтез куркуминоидов. Химический сдвиг 13C-ЯМР DMC приведен в таблице. Таблица 1. Назначение было основано на результатах сообщил Педерсен.11) из-за разницы в на основе используемых растворителей были внесены некоторые модификации в наших собственных ЯМР-экспериментах.

Когда растениям дают уксусную кислоту, сигнал отсутствует. амплифицировали в спектре 13С-ЯМР DMC (рис. 7а). Кормление уксусной кислотой или малоновой кислотой кислота вызвала значительное усиление сигнала (центральный углерод ДМК, рис. 7б и в). Эти результаты подтверждают, что, как и в случае общего поликетида
синтез, малонил-КоА используется в биосинтезе куркуминоиды. Кормление усиленным фенилаланином Два сигнала, соответствующие , той же величины (рис. 7г). Последовательные результаты были получены при различных количествах предшественников или с разным инкубационным периодом использовали прекурсоры (данные не показаны). Это результаты ясно показывают, что образуются куркуминоиды из двух фенилпропаноидных единиц, полученных из фенилаланина и одноуглеродная единица, полученная из малонового кислота.
Adabiyotlar sharhi bo’limida kurkumin va uning fizik kimyoviy hossalari, kimyoviy struktura formulalari, kimyoviy olinish reaksiyalari va ilmiy tadqiqotlar haqida yoritildi. Oziq ovqat o’simliklaridan tibbiyotda qo’llash va ulardan dori darmonlar ishlab chiqarish haqidagi ilmiy fikr va mulohazalar, olimlarning ilmiy izlanishlaridan foydalanildi.
Куркумин и его физико-химические свойства, формулы химической структуры, химические реакции экстракции и научные исследования были освещены в разделе обзора литературы. Были использованы научные мнения и мнения о применении съедобных растений в медицине и производстве из них лекарственных средств, научные исследования ученых.