Immunosorbentlar va ularni olish usullari

Immunosorbentlar va ularni olish usullari
Elishay qondagi antikorlar, gormonlar, peptidlar va oqsillarni aniqlash va o'lchash uchun amalga oshiriladigan fermentga bog'langan immunosorbent tahlili (shuningdek, EIA: Enzim Immunoassay deb ataladi) deb nomlanuvchi asosiy tahlil usulidir.Antikorlar - ma'lum bir antijenga javoban ishlab chiqarilgan qon oqsillari. Bu ba'zi yuqumli kasalliklar bo'lsa, tanadagi antikorlarning mavjudligini tekshirishga yordam beradi.Elishay boshqa antikor tahlillari bilan solishtirganda ajralib turadigan tahlildir, chunki u miqdoriy natijalarni beradi va odatda polistirolli ko'p teshikli plastinka bo'lgan qattiq sirtlarga ketma-ket bog'lanish orqali sodir bo'ladigan o'ziga xos bo'lmagan va o'ziga xos o'zaro ta'sirlarni ajratadi.
Elishay turlari
Elishay testlari antigen va antikorlar o'rtasidagi bog'lanish uchun ishlatiladigan turli usullarga qarab uch turga bo'linishi mumkin, xususan:
Bilvosita Elishay - Antigen mikrotitr qudug'iga qoplanadi
Sendvich ELISA - Antikor mikrotitr qudug'ida qoplangan
Raqobatbardosh Elishay - Antigen bilan qoplangan mikrotiter qudug'i antigen-antikor aralashmasi bilan to'ldiriladi.
Bilvosita Elishay
Bilvosita Elishay namunada antikor mavjudligini aniqlaydi.Antigen mikrotitr plastinkasining quduqlariga biriktirilgan.Antikorlarni o'z ichiga olgan namuna antijen bilan bog'lanish uchun antijen bilan qoplangan quduqlarga qo'shiladi.Erkin birlamchi antikorlar yuviladi va birlamchi antikor bilan bog'lana oladigan ferment bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor qo'shilishi bilan antigen-antikor kompleksi aniqlanadi.Barcha erkin ikkilamchi antikorlar yuviladi. Rangli mahsulotni beradigan maxsus substrat qo'shiladi.Rangli mahsulotning absorbsiyasi spektrofotometriya bilan o'lchanadi.
Sendvich ELISA
Sendvich Elishay namunadagi antigen mavjudligini aniqlashga yordam beradi.Mikrotitr qudug'i antikor bilan qoplangan.Antigenni o'z ichiga olgan namuna quduqqa qo'shiladi va erkin antijenlarni olib tashlash uchun yuviladi.Keyin antigen ustidagi boshqa epitop bilan bog'langan ferment bilan bog'langan ikkilamchi antikor qo'shiladi. Quduq har qanday erkin ikkilamchi antikorlarni olib tashlash uchun yuviladi.Fermentga xos bo'lgan substrat plastinkaga qo'shiladi va o'lchash mumkin bo'lgan rangli mahsulot hosil bo'ladi.
Raqobatbardosh Elishay
Raqobatbardosh Elishay namunadagi antigen konsentratsiyasini aniqlashga yordam beradi.Mikrotitr quduqlari antijen bilan qoplangan.Antikorlar antijeni bo'lgan eritmada inkubatsiya qilinadi.Mikrotitr quduqlariga antigen-antikor kompleksining eritmasi qo'shiladi. Keyin quduq har qanday bog'lanmagan antikorlarni olib tashlash uchun yuviladi.Namunadagi antigen kontsentratsiyasi qanchalik ko'p bo'lsa, quduq bilan qoplangan antigen bilan o'zaro ta'sir qilish uchun mavjud bo'lgan erkin antikorlar kamroq bo'ladi.Quduqda mavjud bo'lgan birlamchi antikorlar sonini aniqlash uchun fermentga bog'langan ikkilamchi antikor qo'shiladi.Keyin kontsentratsiya spektrofotometriya bilan aniqlanadi
Elishay tamoyili
Elishay o'ziga xos antikorlar maqsadli antigenni bog'lashi va bog'langan antijenlarning mavjudligi va miqdorini aniqlash printsipi asosida ishlaydi. Tahlilning sezgirligi va aniqligini oshirish uchun plastinka yuqori yaqinlikdagi antikorlar bilan qoplangan bo'lishi kerak. Elishay antigen-antikor kontsentratsiyasini foydali o'lchashni ta'minlaydi.
ELISA protsedurasi
Elishay qon tekshiruvi o'tkazilishi mumkin bo'lgan eng oson testlardan biridir. Bu tez, tez va bemorning qon namunasini talab qiladi. Elishayning butun jarayoni quyida keltirilgan.Antikor qattiq sirt bo'lgan polistirol plastinkaga biriktirilgan va bakteriyalar, boshqa antikorlar va gormonlar bilan tortiladi yoki ularga yaqinlik qiladi .Antigen bilan qoplangan mikrotiter ushbu antigen-antikor aralashmasi bilan to'ldiriladi, shundan so'ng erkin antikorlar yuvish orqali chiqariladi.Birlamchi antikorga xos bo'lgan ikkinchi antikor qo'shiladi, u odatda ferment bilan konjug qilinadi.Erkin ferment bilan bog'langan ikkilamchi antikorlar plastinkani yuvish orqali chiqariladi.Nihoyat, substrat qo'shiladi. Substrat ferment ta'sirida rangli mahsulot hosil qilish uchun aylanadi, uni spektrofotometriya bilan o'lchash mumkin.Homiladorlikni ko'rsatadigan HCG oqsili Elishay tomonidan aniqlanadi