Immunosorbentlar va ularni olish usullari

POMIDOR VIRUSLARINI IMMUNOFERMENT ANALIZINING “NIQOBLANISH” USULIDA ANIQLASH.
VTM ning pomidor shtammi bilan kasallangan pomidor barglaridan virus ajratiladi. Bu virus polimid granulalariga bifunksional agentlar ( glutar dialdegidi, gossipol ) yordamida 0,1M borat buferida rn 8,5 (50Sda 24 soat) immobilizatsiyalanadi. Sorbentdagi erkin aldegid gruppalari monoetanolamin bilan blokirovka qilinadi. Olingan sorbent virusga qarshi antitelalarni tozalashda ishlatiladi. VTM ning pomidor shtamiga qarshi antitelalar quyonlarni immunizatsiya qilib olinadi. Antitelalar titri 1%-li agar gelida Uxterloni usulida aniqlanadi. VTM ga qarshi zardob 0,05 M tris-NS↑ rn 7,0 buferida ( tarkibida 30 mm kalsiy xlorid, etilenglikol tutgan) 50S da 2 soat mobaynida doimiy ravishda chayqatib dsorbsiyalanadi va sorbent bufer bilan yuvib tashlanadi. Antitelar desorbsiyasi tarkibida 1 M KS1 tutgan 0,05 M tris-naoh buferi, rn 11,0 yordamida amalga oshiriladi. VTM-TSH va fosfolipaza A2 konyugatlari ikki olinadi. Birinchi usulda 0,05 M borat buferi rn 9,0 dagi 0,2 ml ferment eritmasiga ( 2 mg/ml) 0,1 ml VTM suspenziyasi (3mg/ml) qo‘shiladi. Keyin aralashmaga chayqatib tutgan holda tomchilatib 0,1 ml 2,5%-li glutar dialdegidi eritmasi va 0,6 ml 0,1 M borat buferi, rn 9,0 qo‘shiladi. Aralashma 40S da 15-20 soat mobaynida inkubatsiya qilinadi va 2 sutka davomida dializ qilinadi. Kon’yugat eritmasi sentrifugirlangadan ferment so‘ng ferment aktivligi aniqlanadi.
Ikkinchi usul shu usulda olingan kon’yugatni poliamid-kefalin va poliamid-VTM sorbentlar biospetsifik xromatografiya usulida tozalashdan iborat.

Analiz usulining mohiyati quyidagalardan iborat. Ma’lum miqdordagi VTM (turli konsentratsiyalar) ning 0,05 M borat buferi, rn 8,0 dagi eritmasiga 0,1 ml antitela ( 0,35 mkg oqsil) eritmasi qo‘shiladi, eritma hajmi 0,8 ml gacha bufer bilan etkaziladi va 15 minut ushlab turiladi. Keyin 0,1 VTM ning fosfolipaza A2 kon’yugati (0,5mkg oqsil bo‘yicha) va yana 15 minutga qoldirildi. Aralashmaning bir qismi (0,1 mkg oqsil bo‘yicha) 8,5 ml hajmli titrator yacheykasiga qo‘shiladi. Fosfalipaza aktivligini yog‘ kislotalari miqdori bilan o‘lchanadi. Kalibrovka egri chizig‘i orqali virus miqdori aniqlanadi.