Keyingi yillarda kimyo texnologiyada organik moddalarni

Primerlarni tahrirlash

PCR ning o'ziga xosligi matritsa va primerlar, uzunligi 18-30 tagacha bo'lgan qisqa sintetik oligonükleotidlar orasidagi qo'shimcha komplekslarning shakllanishiga asoslanadi. Primerlarning har biri ikkita ipli matritsaning zanjirlaridan biriga to'ldiradi va kuchaygan mintaqaning boshi va oxirini cheklaydi.

Matritsani primer bilan hibridizatsiya qilingandan so'ng (yaltiroq [13]), matris materiyaning qo'shimcha zanjiri sintezi paytida DNK polimeraz uchun primer vazifasini bajaradi (quyida ko'rib chiqing).

Primerlarning eng muhim xususiyati erish nuqtasi (T_ma) murakkab primer matritsa.

T_m - DNK shablonining yarmida oligonükleotid astar bilan kompleks hosil qiluvchi harorat. O'rtacha hisoblash formulasi T_m K + va DMSO ionlarining kontsentratsiyasini hisobga olgan holda qisqa oligonükleotid (va uzoq DNK fragmentlari) uchun:

bu erda L - primerdagi nukleotidlar soni, K + kaliy ionlarining molar kontsentratsiyasi, G + C - barcha guanin va sitosinlarning yig'indisi.

Astarning uzunligi va nukleotid tarkibi noto'g'ri tanlovi yoki tavlanadigan haroratning noto'g'ri tanlanishi holatlarida, shablon DNKning boshqa hududlari bilan qisman qo'shimcha komplekslar shakllanishi mumkin, bu ma'lum bo'lmagan mahsulotlarning ko'rinishiga olib kelishi mumkin. Erish nuqtasining yuqori chegarasi polimerazning optimal harorati bilan chegaralanadi, uning faoliyati 80 ° C dan yuqori haroratlarda tushadi.

Primerlarni tanlashda quyidagi mezonlarga rioya qilish kerak:

40—60 %,

 Yopish t_m primerler (5 ° dan ortiq bo'lmagan farqlar),

 o'ziga xos bo'lmagan ikkilamchi strukturalarning yo'qligi - sochlar [15] va dimerlar [16],

 Gveyn yoki sitosin uchinchi uchida mavjud bo'lishi kerak, chunki ular matritsa molekulalari bilan uchta vodorod aloqalarini hosil qiladi, bu esa hybridizatsiyani yanada barqaror qiladi.