Reaktsiya komponentlarini tahrirlash
Eng oddiy holatda, PCR uchun quyidagi komponentlar talab qilinadi:
DNK matritsasikuchaytirilishi kerak bo'lgan DNKni o'z ichiga oladi.
Ikkita primeristalgan DNK fragmentining turli zanjirlarining qarama-qarshi uchlarini to'ldiradi.
Termostable DNK polimeraz - DNK polimerizatsiyasi reaktsiyasini katalizlaydigan ferment. PCRda foydalanish uchun polimeraza uzoq vaqt davomida yuqori haroratda faol turishi kerak, shuning uchun termofillardan ajratilgan fermentlar - Thermus aquaticatic (Taq-polimeraza), Pyrococcus furiosus (Pfu-polimeraza), Pyrococcus woesei (Pwo-polimeraza), Thermus thermophilus (T.polimeraza) va boshqalar.
Deoksiribonukleosid trifosfatlar (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
Polimeraza ishlatish uchun Mg 2+ ionlari kerak.
Bufer eritmasireaksiya shartlarini ta'minlash - pH, eritmaning ion kuchi. Tuz, sigirning sarum albuminini o'z ichiga oladi.
Reaksiya aralashmasining bug'lanishiga yo'l qo'ymaslik uchun, masalan, vazelin yog ', qaynab turgan yog' tüpka qo'shiladi. Agar isitish qopqog'i ishlatilsa, bu talab qilinmaydi.
Pirofosfataza qo'shilishi, PCR reaktsiyasining samarasini oshirishi mumkin. Bu ferment pirofosfatning o'sib borayotgan DNK zanjiriga nükleotid trifosfatların ortofosfata qo'shilishining yon mahsuloti katalizini katalizlaydi. Pirofosfat PCR reaktsiyasini inkor qilishi mumkin [12].
Do'stlaringiz bilan baham: |