Keyingi yillarda kimyo texnologiyada organik moddalarni

Denaturatsiyani tahrirlash

Ikki qatlamli DNK shabloni DNK zanjirlari ajratilgan holda, 94-96 ° S (yoki ayniqsa, barqaror termostabl polimeraz ishlatilsa, 98 ° S ga qadar) uchun 0,5-2 daqiqa davomida isitiladi. Ushbu bosqich eritma (denatürasyon), chunki ikkita DNK iplari o'rtasidagi vodorod aloqalari vayron qilingan. Odatda, birinchi tsikldan oldin, reaktsiya aralashmasining uzoq muddat isitilishi 2-5 minut davomida shablonni va primerlarni butunlay denat qilish uchun amalga oshiriladi.

Tahrirlash

Zanjirlar ajratilganda, haroratlar primerlar bitta torli matritsaga ulanishi uchun tushiriladi. Ushbu bosqich chaqiriladi tavlanmoq. Kovashish harorati primer tarkibiga bog'liq va odatda primerlarning erish nuqtasiga nisbatan 5 daraja pastroq bo'ladi. Yomonlashtirilgan haroratning tanlovi yoki primerlarning matritsaga (yuqori haroratda) zaiflashuviga yoki noto'g'ri joyda ulanishga va o'ziga xos bo'lmagan mahsulotlarning ko'rinishiga (past haroratda) olib keladi. Kondensatsiya bosqichi vaqti 30 sekund bo'lib, ayni paytda, shu vaqt mobaynida polimeraza allaqachon bir necha yuz nukleotidi sintez qilish uchun vaqt topdi. Shuning uchun eritma nuqtasi 60 ° C dan yuqori bo'lgan primerlarni tanlash va 60-72 ° S da bir vaqtning o'zida tavlanish va bo'shliqni amalga oshirish tavsiya etiladi.