I II III IV
28
18
Рис. 9. Схема расположения аминокислот на хроматограмме:
I - смесь № I; II - смесь № 2; 1У - смесь №3; Ш - стандартная
смесь аминокислот
Очерченные участки бумага вырезают и помещают в пробирки, номера которых должны соответствовать номерам пятен на хроматограммах. В каждую пробирку наливают из бюретки по 10 мл 75 %-ного раствора этилового спирта, насыщенного сульфатом меда (к 500 мл этилового спирта добавляют 0,2 мл насыщенного раствора сульфата меди). Пробирку закрывают пробкой и, периодически перемешивая, добиваются полного перехода кирпично-красной окраски (медной соли сине-фиолетового Руэмана) с бумаги в раствор. На это уходит 15-20 мин. Абсорбцию (оптическая плотность) стандартного и испытуемого растворов измеряют на фотоэлектрокалориметре с зеленым светофильтром (540 нм). В поток сравнения устанавливают кювету с 75%-ным раствором этилового спирта с сульфатом меди.
Количественное содержание аминокислот в исследуемом растворе рассчитывают по соотношению экстинкций исследуемой и стандартной проб.
Пример расчета. Допустим, что в стандартной смеси содержится 1,8 мг глицина в I мл, на стартовую полосу нанесено 0,02 г этого стандартного раствора. Следовательно, на хроматограмму поступило (1,8×0,02) = 0,036 мг глицина. Условимся далее, что абсорбция окрашенных растворов составила 0,288 для стандарта и 0,336 для неизвестной смеси. Тогда содержание глицина в исследуемой смеси, нанесенной на хроматограмму, составит (36´0,336): 0,288=42 мкг. Если далее принять, что исследуемая смесь нанесена на хроматограмму в количестве, например 0,0250 г, то содержание глицина в 1 мл исследуемого раствора составит (42:0,0250) = 1680 мкг, или 1,68 мг/мл.
Оформите результаты собственного эксперимента, сделайте по ним выводы.
Лабораторная работа №15
Разделение ионов Fe3+, Co 2+, Ni 2+
Do'stlaringiz bilan baham: |