Laboratoriya ishi №1 тexnika havfsizlik qoidalari bilan tanishish molekulyar biologiyaning metodlari

Pereaminlash reaksiyasi
Aminokislotalardan aminoguruhni erkin ammiak shaklida ajratib chiqmasdan -ketokislotaga ko‘chirilishi pereaminlanish yoki trans-aminlanish deb ataladi. Reaksiyani umumiy shaklda quyidagicha yozish mumkin.

R^1 R^2 R^1 R^2 | | | | CH - NH2 + C = 0 C = 0 + CH - NH2 | | | | COOH COOH COOH COOH

Pereaminlanish jarayoni barcha to‘qimalarda keng tarqalgan fermentlar-aminotransferazalar ishtirokida boradi. Aminotransferazalar piridoksalfosfat proteinlar bo‘lib, ularning kofermenti oraliq fosfopiridoksaldir (vitamin B₆).

Piridoksalfosfat
Pereaminlanish reaksiyasi davomida piridoksalfosfat piridok-saminfosfatga aylanadi, so‘ngra aminoguruha-ketokislotaga ko‘chiriladi va yana piridoksalfosfatga aylanadi.
Pereaminlash reaksiyasi to‘qimalarida keng tarqalgan. Barcha aminokislotalar pereaminlanish reaksiyasida ishtirok etadi. Glutamat, asparagin, alanin bilan bu reaksiya tez o‘tadi. Glitsin, leysin izoleysin, gistitsin, triptofan, fenilalanin va tirozin qiyinroq pereaminlanadi.
Piridoksaminfosfat

Pereaminlanish reaksiyasi azot alamashinuvida alohida ahamiyatga ega. Birinchidan, bu reaksiya natijasida α - ketokislotalardan yangi aminokislotalar sintezlanadi. Ikkinchidan, pereaminlanish reaksiyasi aminokislotalar parchalanishidagi usullardan hisoblanadi.

Ferment preparatini tayyorlash +4°C da olib boriladi. Ferment preparatini olish uchun birorta hayvon so‘yilib, skelet muskuli kesib olinadi va qaychi bilan maydalanadi. Hosil bo‘lgan to‘qima bo‘tqasini gomogenizator stakaniga solib, 1:5 nisbatda 0,1 % li KHCO₃ eritmasidan qo‘shib 2 minut davomida gomogenizator bilan maydalanadi. Gomogenat to‘rt qavat doka orqali filtrlanadi va u tajriba uchun ishlatiladi. Tajribani olib borish uchun probirkalarga quyidagi sxema reaksiyasi aralashmalari tayyorlanadi:

Probirka- larning raqami

CH2 JCOOH ni KHCO3 dagi eritmasi, ml

Glyutamin kislota, ml

Pirouzum kislota, ml