Обычно в среду Чапека добавляют сахарозу (30 г на литр). В модифицированной среде вместо сахарозы добавлена лактоза (в том же количестве), так как при добавлении лактозы стимулируется выработка именно ферментов целлюлазного комплекса (на среде с сахарозой - ксилоназного). - Обычно в среду Чапека добавляют сахарозу (30 г на литр). В модифицированной среде вместо сахарозы добавлена лактоза (в том же количестве), так как при добавлении лактозы стимулируется выработка именно ферментов целлюлазного комплекса (на среде с сахарозой - ксилоназного).
- Добавляют молочной кислоты из расчета 0,4 мл на 100 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Среду заражают небольшим комочком почвы.
- Чашки Петри помещают в термостат при температуре 420С (для интенсификации развития гриба). Через 3 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам и характерной пигментации среды.
- Триходерма зеленая (Trichoderma viride) и триходерма древесная (Т. lignorum) появляются на Чапек-агаре вначале в виде бесцветного мицелия, который быстро разрастается и с возрастом приобретает зеленый цвет. Колонии этих грибов бывают различных оттенков, от лимонно-желто-зеленого цвета до темно-зеленого [37].
- 2) Твердофазное культивирование
- Культивирование мицелиальных грибов в твердой фазе проводили в кюветах емкостью 0,5 л. Содержание среды в кюветах - 250 г. Перемешивание осуществляли вручную - шпателем.
- Культивирование мицеллиальных грибов проводилось на специально разработанных средах, представляющих собой измельченную древесину, увлажненную раствором солей и сахаров (как для среды Чапека). Объем увлажняющей жидкости составлял 200-400 мл на 1 кг древесины.
- Посевной материал для кювет выращивали на чашках Петри. Чашки Петри засевали суспензией спор, полученной путем смыва увлажняющей жидкостью с газона 7-суточной культуры на среде Чапека. Во всех случаях посевной материал вносился в количестве 10% от объема ферментационной среды [38].
- После культивирования микроорганизмов был проведён эксперимент по сравнению эффективности кислотного и ферментативного гидролиза при получения гексоз (глюкозы) из целлюлозосодержащего сырья. Были проведены исследования следующего целлюлозного сырья: древесина тополя, трава (смесь разнообразных трав), высшая водная растительность (макрофиты). Степень конверсии растительного сырья в моносахариды определялась через разные промежутки времени после начала гидролиза: через 3 ч., 24 ч., 48 ч., 72 ч.
- Определение углеводов (моносахаридов) проводилось по результатам качественной реакции аммиачного раствора оксида серебра на глюкозу (реакция “серебряного зеркала”) по количеству выделившегося осадка серебра гравиметрическим методом. Методика проведения реакции соответствует литературным данным
Do'stlaringiz bilan baham: |
