Nima uchun elisa kerak?
Download 25.23 Kb.
|
Ifa tahlili
|
Ifa infektsiyasi. Ifa qon testi Elishay tahlili - bu nima? Ushbu diagnostika usulining to'liq nomi ferment immunoassay deb ataladi va u inson tanasi ishlab chiqaradigan turli sinflardagi antikorlarni yoki immunoglobulinlarni periferik qonda aniqlashga asoslangan. Vrachning amaliyotida Elishay tahlili har qanday yuqumli patologiyani tashxislash zarur bo'lganda juda muhim o'rin tutadi. Ushbu tahlil nafaqat yuqumli kasallikning mavjudligini, balki patologik jarayonning bosqichini ham ko'rsatadi. Bundan tashqari, nafaqat patogenga nisbatan, Elishay usuli foydalanish uchun ko'rsatiladi: u allergik kasalliklarni tashxislash uchun ishlatiladi. Ushbu test immunitet tizimidagi muammolarni, gematopoetik tizimning ko'plab kasalliklari, otoimmün va boshqa kasalliklarni aniqlash imkonini beradi. Nima uchun ELISA kerak? Barcha tadqiqotchilar "antikor" nomi juda yomon tanlanganiga ishonishga moyil. Ammo baribir, bu immunoglobulinlarning muhim xususiyatini aks ettiradi: ular zararli moddalarni bog'lash va zararsizlantirishga qodir, ularga "qulf" uchun "kalit" kabi yaqinlashadi. Qondagi antikorlar miqdori nafaqat tananing umumiy infektsiyalardan himoya qilish qobiliyatini, balki turli xil otoimmün kasalliklarda, masalan, romatoid artrit yoki ankilozan spondilitda paydo bo'lishi mumkin bo'lgan aylanma immun komplekslarini shakllantirish qobiliyatini ham aks ettiradi. Antigen bilan antikorlarning komplekslari (yuqumli tabiatning zararli omili) tananing "begona odamlar" ning kiritilishiga bo'lgan munosabati natijasidir. Shuning uchun immunitet tizimi ularni tanib olishni o'rganadi, limfotsitlar yordamida u immunokompetent hujayralarni o'rgatadi va ular juda o'ziga xos antikorlarni ishlab chiqarishga qodir. Shunday qilib, Epstein virusiga antikorlar virusli gepatit C yoki E. coli va anti-HAV yoki gepatit A virusiga antikorlardan, xaftaga to'qimalariga otoantikorlardan farqli ravishda joylashtirilgan. Aynan immunoglobulinlarning yuqumli patogenga yuqori o'ziga xosligi va mosligi yuqori qiymatga ega bo'lgan qonning ferment immunoassay kabi laboratoriya tadqiqotini amalga oshiradi. Antigen va antijenlarning yagona kompleksga (antigen-antikor) kuchli bog'lanishidan so'ng, zararli omillar tana to'qimalariga zarar etkazish qobiliyatini yo'qotadi va keyin bu komplekslar neytrallanadi yoki neytrofillar tomonidan fagotsitoz bilan parchalanadi va "hazm qilinadi". tanasi. Elishay qon testi bizning tanamiz qanday o'ziga xos patogen omilga duch kelishini, tananing infektsiya bilan o'zaro ta'sirining qaysi bosqichida ekanligini ko'rsatishi mumkin. Tadqiqotdan so'ng shifokor yuqori darajadagi aniqlik bilan prognoz qilishi, muayyan turdagi davolanishni buyurishi mumkin va ba'zi hollarda hatto bemorning umr ko'rish davomiyligini aniqlay oladi, ayniqsa surunkali virusli infektsiyalarda, masalan, virusli gepatit C. Ammo ba'zi hollarda tanada umuman infektsion qo'zg'atuvchilar yo'q va antikorlar o'z a'zolari va to'qimalariga "xatolik bilan" kirib boradi, chunki immunokompetent hujayralar noto'g'ri ma'lumot olgan. Bunday kasalliklar otoimmun deb ataladi va ferment immunoassay ham bu surunkali patologiyani tanib olishga yordam beradi va tashxis qo'yishda yordam beradi. Immunoglobulinlar haqida ko'proq Hammasi bo'lib, inson tanasi belgilangan antikorlarning 5 ta ma'lum sinfini ishlab chiqaradi Ig(bu immunoglobulinlarni anglatadi), A, M, G, E va D sinflariga mansub. Ularning barchasi Elishay - tahlil natijalarini talqin qilishda katta ahamiyatga ega. Albatta, ko'proq komplekslar mavjud va ularning hammasi ham hali ochiq emas. Ammo turli kasalliklarni tashxislashda antikorlarning dastlabki uch turi eng qimmatlidir. ELISA qon testi maksimal ma'lumotdan foydalanadi: qonda antikorlar paydo bo'lgan moment, vaqtga qarab ularning kontsentratsiyasining o'zgarishi, yo'qolish vaqti va o'ziga xos antikorlarning turi. Shunday qilib, birlamchi, o'tkir yuqumli jarayonning ishtirokchilari M sinfidagi immunoglobulinlar bo'lib, ular kasallikning klinik kechishi o'chirilgan bo'lsa ham, har doim o'tkir bosqichni ko'rsatadi. Oddiy misol, o'tkir virusli gepatit B yoki C ning anikterik shaklidir. Gepatitni ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili odamda o'tkir gepatit borligini va gipoxondriyadagi og'riqlar, quruq og'iz, bo'g'imlarning og'rig'i va boshqa nojo'ya belgilar mavjudligini ko'rsatadi. o'ziga xos alomatlar osongina tushuniladi. Bir necha hafta o'tgach, bu antikorlar tobora yo'qolib borayotgan kontsentratsiyalarda topilib, G sinfidagi immunoglobulinlar hosil bo'ladi.Ular qonda ko'p oylar va hatto yillar davomida aniqlanadi va tiklanishni ko'rsatadi va keyin ular umr bo'yi qolishi mumkin. kuchli immunitet. Bu patogenlarning antijenlariga qarshi kuchli himoyani ko'rsatadi. Demak, aynan shu sinf antikorlari odamni kuydirgi va vaboning takroriy holatlariga qarshi immunitet hosil qiladi. Ammo bu antikorlar antijenler mavjudligida ularning zararli ta'siriga to'sqinlik qilmaydigan holatlar mavjud. Bunday holda, surunkali jarayonning faolligi oshishi haqida gapirish mumkin. Avvalo, siz bunday tahlil yo'qligini tushunishingiz kerak - "Elishay uchun faqat qon". Gepatit, ba'zan ureaplasma yoki sifiliz uchun tahlil mavjud. Shunday qilib, Elishay uchun qon topshirish faqat maqsadli bo'lishi mumkin, kerakli infektsiyani qidirishni "buyurtma". Nima uchun tomirdan qon topshirishni, nimaga e'tibor berishni bilmay qolish juda tushunarsiz. Shuning uchun Elishay usuli diagnostik qidiruvda muhim ahamiyatga ega bo'lgan kuchli vositadir. Ushbu tahlilni faqat shifokor buyurishi mumkin, chunki u maqsadli ravishda ushbu alomatlar bilan tavsiflangan infektsiyani qidiradi. Oddiy odam, albatta, "barcha infektsiyalar" uchun 150 ta Elishay qon testini buyurishi mumkin, ammo bu tashxis qo'yish uchun asossiz va qimmat yondashuv bo'lib, hamma narsa uchun testlarni o'tkazadi. Ushbu tahlillarni tayinlash quyidagi kasalliklar va sharoitlar uchun eng ko'p talab qilinadi: Har xil mikrobial va virusli infektsiyalar, yuqumli kasalliklar belgilari - toshma, isitma, sariqlik, shishgan limfa tugunlari, diareya sindromi, jinsiy yo'l bilan yuqadigan kasalliklarga shubha. Elishay usuli ureaplazma va mikoplazma, sifiliz va xlamidiya, sil va sitomegalovirus infektsiyasi, gerpes, virusli gepatit va Epstein-Barr virusini aniqlashda yordam beradi. Hozirgi vaqtda 500 ga yaqin turli infektsiyalarni ferment immunoassay usuli yordamida tekshirish mumkin. Agar gelmintik invaziyadan shubha qilingan bo'lsa va allergiya, qon eozinofiliyasi, qichishish, dispepsiya va vazn yo'qotish kabi alomatlar mavjud bo'lsa, Quincke shishi, ürtiker, nafas qisilishi va astmatik bo'g'ilish xurujlarini keltirib chiqaradigan allergenlarni aniqlashda. Bunday holda, o'ziga xos Ig E aniqlanadi va allergenni aniq aniqlashga yordam beradigan butun allergo panellari mavjud - kalamar yoki qisqichbaqalar, dafniya o'z ichiga olgan quruq baliq ovqatlari, uy changi. Pichan isitmasi bilan bu usul sizga bahorda aksirish va lakrimatsiyani keltirib chiqaradigan don, buta yoki daraxtni topishga imkon beradi,. Ushbu usul revmatologlar tomonidan davolangan shubhali otoimmün kasalliklar uchun ko'rsatiladi, Agar o'smaning o'sishi va faolligiga shubha bo'lsa, Immunitet tanqisligi va OIV infektsiyasini kompleks diagnostika qilishda, Qon kasalliklarida va transplantatsiyada, immunitetni har tomonlama baholash uchun, masalan, jigar yoki buyrak transplantatsiyasidan oldin. Endi biz nima uchun ELISA uchun qon topshirishingiz kerakligini bilamiz. Keling, ushbu tadqiqot qanday amalga oshirilayotganini bilib olaylik. Tahlil qanday amalga oshiriladi? Klassik material - bemorning venoz qoni. Agar kerak bo'lsa, siz turli xil suyuqlik va to'qimalarni tekshirishingiz mumkin: shilliq, tupurik, bachadon bo'yni sekretsiyasi, miya omurilik suyuqligi, ko'zning shishasimon tanasi, kindik ichakchasidagi va amniotik suyuqlik. Shuni esda tutish kerakki, turli xil dori-darmonlarni qabul qilish, ortiqcha jismoniy faollik, spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish testlar natijalarini sezilarli darajada buzishi mumkin. Ushbu tahlilni amalga oshirishga imkon beruvchi bir necha usullar mavjud. Ko'pincha klinik laboratoriyalarda fotometrik usul qo'llaniladi. Bunday holda, bo'yoq bilan etiketlangan moddalar qo'llaniladi, ularning reaktsiyasi va antigen-antikor kompleksining belgilaridan keyin ularning rangi o'zgaradi. Natijada, eritmaning optik zichligi ham o'zgaradi va bu o'zgarish aniqlangan antikorlarning konsentratsiyasiga to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir. Ushbu og'ishlarni o'lchash uchun laboratoriya spektrofotometrlari muvaffaqiyatli qo'llanilgan. Shuningdek, Elishayni o'tkazish uchun florimetrik usul qo'llaniladi, uning asosi floresan hisoblanadi. Bu erda ham o'rganilayotgan namunalar ustida joylashgan floresan moddalarning intensivligi hisoblanadi. Nihoyat, immunoassaylarda antigenlar va antikorlar uchun maxsus belgilar bo'lgan fermentlarning faolligini aniqlash uchun elektrokimyoviy usullar qo'llaniladi. Elishay usulining o'zi ko'pincha gidroksidi fosfataza, horseradish peroksidaza va galaktosidaza kabi fermentlardan foydalanishni o'z ichiga oladi. Ushbu fermentlar antikorlar yoki antijenler bilan bog'lanib, ularning faolligi tufayli ularni belgilashga qodir. Usulning kamchiliklari va uning afzalliklari Aniq "afzalliklar" tahlilning demokratik narxini, aholining katta guruhlarida, masalan, homilador ayollarni OIVga tekshirishda skriningdan foydalanish imkoniyatini o'z ichiga oladi. Ferment immunoassay usuli juda o'ziga xosdir va ko'plab kasalliklarni davolash sifatini nazorat qilish uchun ishlatilishi mumkin. Tahlil tezda tayyorlanishi va bemor uchun oddiy va xavfsiz bo'lishi muhimdir. Biroq, ko'plab tuzoqlar mavjud. Shunday qilib, agar immunoglobulinlar aniqlanmasa, bu kasallikning 100% yo'qligini anglatmaydi. Axir, immunitet tanqisligi fonida, tana antikorlarning sintezi uchun oddiygina "kuchli" bo'lmasligi mumkin. Agar bemorda og'ir jigar etishmovchiligi bo'lsa, u holda jigar oddiygina proteinni - antikorlar uchun qurilish materialini sintez qila olmaydi. Bunday holda, natija seronegativ deb ataladi va infektsiyani tasdiqlash to'g'ridan-to'g'ri va eng ilg'or tadqiqot usuli - PCR yoki polimeraza zanjiri reaktsiyasi bilan talab qilinadi. Fermentga bog'langan immunosorbent tahlilidan farqli o'laroq, bu usul tananing yuqumli jarayonga reaktsiyasini aniqlamaydi (bu nuqsonli yoki umuman yo'q bo'lishi mumkin), PCR to'g'ridan-to'g'ri irsiy materialni aniqlaydi yoki patogenning o'zi topiladi. (ELISA) laboratoriyada qonni tekshirish usuli bo'lib, maxsus hujayralarni - turli kasalliklarga antikorlarni qidirishga asoslangan. Usul nafaqat patogenni aniqlashga, balki patologik jarayonning qaysi bosqichida ekanligini aniqlashga imkon beradi. Ikkinchisi bemorning prognozi va keyingi davolanishi uchun juda muhimdir. Usulning afzalliklari va kamchiliklari Barcha zamonaviy diagnostika usullari orasida Elishay eng innovatsion va texnik jihatdan aniq hisoblanadi. Uning asosiy afzalliklari quyidagilardan iborat: Bemorning qonida yuqumli kasalliklarga qarshi barcha mavjud antikorlarni izlash qobiliyati. Tadqiqot usulining yuqori mavjudligi. Bugungi kunda Elishay tahlillari har qanday o'rta laboratoriya tomonidan amalga oshirilishi mumkin. Usulning deyarli 100% o'ziga xosligi va sezgirligi. Raqamni taqqoslash tufayli antikorlar va antijenlarni qidirish, shuningdek, patologik jarayonning bosqichini aniqlash va uning dinamikasini kuzatish qobiliyati. Boshqa testlarga nisbatan bunday bir qator afzalliklar tahlilning yagona va yagona kamchiliklarini to'liq qoplaydi: u antikorlarni aniqlashga qodir, ammo patogenning o'zi emas. Tahlilni baholash uchun asosiy atamalar Elishay tahlili nima ekanligini, nima ekanligini va qanday amalga oshirilishini tushunish uchun siz mutaxassislar tomonidan qo'llaniladigan asosiy atamalar bilan tanishishingiz kerak. Antikor- inson immunitet tizimining hujayralari tomonidan ishlab chiqariladigan protein (B tipidagi limfotsitlar). Ular begona agent yoki moddaning yutilishiga o'ziga xos reaktsiya bilan javob berishadi. Antikorlarning yana bir nomi - immunoglobulinlar, ular turli sinflarga tegishli: A, E, M, G. Ular bir-biridan massasi, javob tezligi, yarim yemirilish davri va boshqa bir qator xususiyatlar bilan farqlanadi. Odatda odam qonida asosan G toifali immunoglobulinlar mavjud.Har qanday infektsiya sodir bo'lsa, A va M immunoglobulinlarining miqdori keskin ortadi.Allergik reaktsiyalarda E immunoglobulinlari ishtirok etadi. Antigen- organik kelib chiqishi va yuqori molekulyar og'irlikdagi xorijiy agent. Ko'pincha bu patogenlar yoki ularning biologik faol moddalari. Antigen-antikor kompleksi yoki immun kompleksi to'g'ridan-to'g'ri begona moddalar va immunoglobulinning birikmasidan iborat bo'lib, bu immunitet reaktsiyasini keltirib chiqaradi. Usulning mohiyati va ko'lami Bemorlarda ko'pincha savol tug'iladi: Elishay tahlili, bu nima, u qanday amalga oshiriladi va u nima uchun? Usul haqida uning bosqichlarini qisqacha tavsiflab, qulay tarzda gapirishingiz mumkin. Tayyorgarlik bosqichi. Laboratoriya shifokori 96 quduqli maxsus plastinkadan foydalanadi. Har bir quduq yuzasiga ma'lum bir patogenning antijeni qo'llaniladi. 1-bosqich Qon olinadi, keyin u quduqqa tomchilab yuboriladi. Quduq qondagi antijen va antikor o'rtasidagi reaktsiyani boshlaydi. 2-bosqich Quduqda immun komplekslarning shakllanishi bilan reaktsiya to'liq davom etadi. Natijada, ma'lum bir rangdagi modda hosil bo'ladi. Rangning intensivligi bemorning qonidagi har bir o'ziga xos patogenga antikorlar miqdoriga bog'liq. 3-bosqich Natijani fotometriya orqali baholash. Buning uchun spektrofotometr deb ataladigan maxsus qurilma ishlatiladi. U quduqdagi materialning zichligini va nazorat namunasini taqqoslaydi. Bundan tashqari, qurilma matematik tahlil orqali natijani yaratadi. Elishay natijalari va maqsadini baholash Natijani talqin qilish bir nechta muhim nuanslarga bog'liq: -Quduqning optik zichligi. -Quduq plastinka ishlab chiqaruvchisi (sinov tizimlari). -Tadqiqot o'tkazilgan laboratoriya. Ushbu nuanslarni hisobga olgan holda, siz hech qachon turli sinov tizimlari yoki turli laboratoriyalardan olingan ikkita natijani solishtirmasligingiz kerak. Elishay tahliliga ta'sir qiladigan yana bir muhim nuqta - bu antikorlarning avidligi. Ushbu parametr antigen miqdorini, antigen-antikor kompleksidagi bog'lanishning mustahkamligini tavsiflaydi. Uning ta'rifi protein tuzilmalarini hal qilish uchun immun kompleksini karbamid bilan davolashga asoslangan. Bu sizga antigen va antikor o'rtasidagi zaif aloqalarni yo'q qilish va faqat kuchlilarini qoldirish imkonini beradi. Avidite uchun tadqiqotning ahamiyati shundaki, u infektsiyaning davomiyligini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Ushbu ma'lumot homilador ayollarga tashxis qo'yish uchun juda muhimdir. ELISA qon testi quyidagilarga xizmat qiladi: -Patogenlarning turli antijenlarini qidirish. -Gormonal fonni o'rganish. -Otoimmün kasallikning mavjudligini tekshirish. -Saraton belgilarini aniqlash uchun. -Elishay navlari -Elishay tahlilining quyidagi turlari mavjud: -Bilvosita. -To'g'riga. -Raqobatbardosh. -blokirovka qilish usuli. Ammo, aslida, bugungi kunda faqat ELISA (ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili) deb ataladigan usul qo'llaniladi. U quduq yuzasida rang o'zgarishi bilan antigen-antikor kompleksi hosil bo'lishining yuqorida tavsiflangan reaktsiyasiga asoslanadi. To'g'ridan-to'g'ri miqdoriy Elishay qon testi alohida e'tiborga loyiqdir. Bu tahlil turi emas, balki natijalarni baholash usuli. Unga rahmat, antikorlar soni hisoblanadi va ularning sinflari aniqlanadi. Natija namunaning optik zichligiga, Elishay tekshiruvi o'tkazilgan sinov tizimiga, shuningdek, laboratoriyaga bog'liq. Elishay tomonidan aniqlangan kasalliklar ELISA - bu juda ko'p turli xil yuqumli kasalliklarni aniqlashga imkon beruvchi qon testi. Bundan tashqari, virusli va bakterial kasalliklar bir xil aniqlik bilan aniqlanadi. Masalan, immun komplekslarni shakllantirish yordamida quyidagi kasalliklarning qo'zg'atuvchisi antijenlari mavjudligini isbotlash mumkin: Bundan tashqari, ELISA sizga quyidagilarni aniqlashga imkon beradi: -Saraton markerlari - TNF (o'simta nekrozi omili), PSA (prostata o'ziga xos antijeni), CEA (saraton-embrion antijeni), CA-125 (tuxumdon o'simtasi markeri) -Homiladorlik gormoni hCG (inson xorionik gonadotropini). -Reproduktiv tizimning buzilishi: ayol va erkak jinsiy tizimining gormonlari. -Qalqonsimon bezning patologiyasi. Shuni ta'kidlash kerakki, bugungi kunda OIV uchun ELISA testi ushbu xavfli kasallikni tashxislashning asosiy usuli hisoblanadi. Elishay materiallari va namuna olish texnikasi Elishayni o'tkazish uchun bemorning qoni och qoringa olinadi. Bundan tashqari, qondan sarum olinadi, u to'g'ridan-to'g'ri tahlil qilish uchun ishlatiladi. Bundan tashqari, Elishay miya omurilik suyuqligi (CSF), bachadon bo'yni shilimshiq (bachadon bo'yni), amniotik suyuqlik va hatto shishasimon suyuqlik (ko'z olmasi) ustida amalga oshirilishi mumkin. Qon topshirishdan oldin bemorga hech qanday dori-darmonlarni qabul qilmaslik kerakligi haqida ogohlantiriladi va antibiotiklar va antiviral preparatlar bilan davolashni qon namunasini olishdan kamida ikki hafta oldin yakunlash tavsiya etiladi. Natijalarni qabul qilish va talqin qilish shartlari Laboratoriyadan javob olish vaqti uning ish tezligiga bog'liq emas, balki kasallikning bosqichiga va qonda qanday antikorlar allaqachon paydo bo'lganiga bog'liq. Masalan, immunoglobulinlar M tahlil qilish uchun qon qabul qilinganidan keyin taxminan 2 hafta o'tgach paydo bo'ladi va bu jarayon birlamchi infektsiya bosqichida yoki surunkali kasallikning kuchayishi sodir bo'lganligini anglatadi. Shu bilan birga, birlamchi infektsiya paytida M va G sinflarining antikorlari paydo bo'ladi. Bundan tashqari, ikkinchisi 4 haftadan keyin aniqlanishi mumkin. IgA 2-3 haftadan so'ng yakka o'zi yoki M bilan birga paydo bo'ladi, bu o'tkir infektsiyani ko'rsatadi yoki G bilan birga surunkali jarayonni ko'rsatadi. Qonda antikorlarning paydo bo'lishi uchun bunday turli xil atamalar bemorni natijani uzoq vaqt kutishga majbur qiladi. Elishay tahlili o'tkazilgandan keyin bir oydan ko'proq vaqt kutish mumkin. Shifokor tomonidan dekodlash va talqin qilish ham ma'lum vaqtni oladi. 5.1 Elishayning mohiyati va tasnifi. Elishay 60-yillarning o'rtalarida paydo bo'lgan va dastlab gistologik preparatda antigenni aniqlash, shuningdek, immunodiffuziya va immunoelektroforez testida cho'kma chiziqlarini vizualizatsiya qilish uchun usul sifatida ishlab chiqilgan va keyin antigenlarni miqdoriy aniqlash uchun ishlatila boshlangan va biologik suyuqliklardagi antikorlar. Usulni ishlab chiqishda E. Engvall va R. Pelman, shuningdek, ulardan mustaqil ravishda V. Van Veeman va R. Schurs ishtirok etdi. Guruch. 6 Elishayning asosiy printsipi: antijenlarni aniqlash; 2) antikorlarni aniqlash Usul antikorning antijen bilan o'ziga xos bog'lanishiga asoslanadi, komponentlardan biri ferment bilan konjugatsiyalanadi; tegishli xromogen substrat bilan reaktsiya natijasida rangli mahsulot hosil bo'ladi, uning miqdori bo'lishi mumkin. spektrofotometrik tarzda aniqlanadi (6-rasm). Har xil tashuvchilarda antigen va antikorlarni immobilizatsiya qilish, ularning bog'lanish faolligini saqlab qolish imkoniyatining ochilishi biologiya va tibbiyotning turli sohalarida Elishayning qo'llanilishini kengaytirish imkonini berdi. Monoklonal antikorlarning paydo bo'lishi Elishayning keyingi rivojlanishi bo'lib xizmat qildi, bu uning sezgirligini, o'ziga xosligini va natijalarning takrorlanishini oshirishga imkon berdi. Nazariy jihatdan, Elishay zamonaviy immunokimyo va kimyoviy enzimologiya ma'lumotlariga, antigen-antikor reaktsiyasining fizik-kimyoviy qonuniyatlarini bilishga, shuningdek, analitik kimyoning asosiy tamoyillariga asoslanadi. Elishayning sezgirligi va uning davomiyligi bir necha asosiy omillar bilan belgilanadi: antigen-antikor reaktsiyasining kinetik va termodinamik xususiyatlari, reagentlar nisbati, ferment faolligi va uni aniqlash usullarining o'lchamlari. Umuman olganda, antigen-antikor reaktsiyasini oddiy sxema bilan tasvirlash mumkin: +[AG]↔[ATAG] Past molekulyar og'irlikdagi birikmalardan tortib viruslar va bakteriyalargacha bo'lgan o'rganish ob'ektlarining xilma-xilligi, shuningdek, Elishay dan foydalanish shartlarining xilma-xilligi bilan bog'liq bo'lgan g'ayrioddiy keng ko'lamli vazifalar ushbu usulning juda ko'p sonli variantlarini ishlab chiqishni aniqlaydi. . Elishayning har qanday varianti 3 ta majburiy bosqichni o'z ichiga oladi: 1. immun kompleks hosil bo'lishiga olib keladigan, sinov birikmasini unga xos bo'lgan antikor tomonidan tan olinishi bosqichi; 2. konjugatning immun kompleks yoki erkin bog'lanish joylari bilan bog'lanishining shakllanish bosqichi; 3. ferment belgisini ro'yxatga olingan signalga aylantirish bosqichi. Elishay usullarini tasniflash bir necha yondashuvlarga asoslanadi: 1. Elishayning birinchi bosqichida mavjud bo'lgan reagentlar turiga ko'ra, raqobatbardosh va raqobatdosh bo'lmagan usullar farqlanadi. A) Raqobatbardosh Elishay usulida, birinchi bosqichda tizim tahlil qilingan birikmani ham, uning analogini ham o'z ichiga oladi, ferment bilan belgilangan va u bilan muayyan bog'lanish joylari uchun raqobatlashadi. B) Raqobatsiz usullar uchun tizimda birinchi bosqichda faqat tahlil qilinayotgan birikma va unga xos bog`lanish markazlarining bo`lishi xarakterlidir. 2. Barcha Elishay usullari bir hil va heterojen bo'linadi. Agar Elishayning barcha uch bosqichi eritmada o'tkazilsa va asosiy bosqichlar o'rtasida hosil bo'lgan immun komplekslarni reaksiyaga kirishmagan komponentlardan ajratishning qo'shimcha bosqichlari bo'lmasa, usul bir hil bo'lganlar guruhiga kiradi. Odatda past molekulyar og'irlikdagi moddalarni aniqlash uchun ishlatiladigan bir hil Elishayning asosi antijen yoki antikor bilan birlashganda ferment faolligini inhibe qilishdir. Antigen-antikor reaktsiyasi natijasida ferment faolligi tiklanadi. Antikor ferment yorlig'i bo'lgan antijen bilan bog'langanda, ferment faolligi yuqori molekulyar og'irlikdagi substratga nisbatan 95% ga inhibe qilinadi, bu substratning fermentning faol markazidan sterik ravishda ajralib chiqishi bilan bog'liq. Antigen konsentratsiyasi ortishi bilan ko'proq antikorlar bog'lanadi va yuqori molekulyar og'irlikdagi substratni gidrolizlashi mumkin bo'lgan ko'proq erkin antigen-ferment konjugatlari saqlanadi. Tahlil juda tez amalga oshiriladi, bitta aniqlash uchun 1 daqiqa kerak bo'ladi. Usulning sezgirligi ancha yuqori. Uning yordamida siz pikomollar darajasidagi moddani aniqlashingiz mumkin. Geterogen usullar uchun ikki fazali tizimda qattiq faza - tashuvchi va immun komplekslarni turli fazalarda (hosil bo'lgan) reaksiyaga kirmagan komponentlardan (yuvish) ajratishning majburiy bosqichi ishtirokida tahlil qilish odatiy holdir. immun komplekslar qattiq fazada, reaksiyaga kirishmagan komplekslar esa eritmada). Birinchi bosqichda immun komplekslarning shakllanishi qattiq fazada davom etadigan geterogen usullar qattiq fazali usullar deb ataladi. Usullar bir jinsli-geterojen deb tasniflanadi, agar 1-bosqich - eritmada o'ziga xos komplekslarning hosil bo'lishi sodir bo'lsa, so'ngra komponentlarni ajratish uchun immobilizatsiyalangan reaktivli qattiq faza qo'llaniladi. 3. Tekshiriluvchi moddani aniqlash tamoyiliga ko'ra: A) Moddaning (antigen yoki antitelo) kontsentratsiyasini u bilan o'zaro ta'sir qiluvchi bog'lanish markazlari soni bo'yicha bevosita aniqlash. Bunday holda, ferment yorlig'i hosil bo'lgan o'ziga xos AG-AT kompleksida bo'ladi. Analitning konsentratsiyasi ro'yxatga olingan signalga to'g'ridan-to'g'ri proportsional bo'ladi. B) Moddaning kontsentratsiyasini bog'lanish joylarining umumiy soni va qolgan erkin bog'lanish joylari o'rtasidagi farq bilan aniqlash. Bunday holda, tahlil qiluvchi moddaning konsentratsiyasi oshadi va qayd etilgan signal kamayadi, shuning uchun bu holda qayd etilgan signalning kattaligiga teskari bog'liqlik mavjud. 5.2 Elishayda ishlatiladigan komponentlarning xususiyatlari. Fermentlar. Ferment belgilari juda kuchli katalitik ta'sirga ega; bitta ferment molekulasi ko'p miqdordagi substrat molekulalari bilan reaksiyaga kirishishi mumkin. Shunday qilib, ahamiyatsiz miqdorda mavjud bo'lgan ferment mahsulotlarning hosil bo'lishi, u katalizlaydigan reaktsiya bilan aniqlanishi va miqdorini aniqlashi mumkin. Fermentlarni yorliq sifatida ishlatishning yana bir afzalligi molekulada ko'plab funktsional guruhlar (sulfgidril, karboksil, tirazin qoldiqlari va boshqalar) mavjudligi bilan bog'liq bo'lib, ular orqali ligand molekulalarini kovalent bog'lash mumkin. ELISA da qo'llaniladigan fermentativ markerlar quyidagi xususiyatlarga ega bo'lishi kerak: – fermentning yuqori faolligi va barqarorligi tahlil sharoitida, modifikatsiya paytida va antikorlar yoki boshqa oqsillar bilan konjugatsiyada; – sezgir substratlarning mavjudligi va fermentativ reaksiya mahsuloti yoki substratlarini aniqlash usulining soddaligi; - taglik tizimlarini yanada mustahkamlashga moslashtirish imkoniyati; - o'rganilayotgan biologik suyuqlikda ferment va uning ingibitorlarining yo'qligi. Elishay kamida 15 xil fermentlardan foydalanishi mumkin. Horseradish peroksidaza (HRP), gidroksidi fosfataza (AP) va b-D-galaktosidaza yuqoridagi talablarga muvofiq eng katta foydalanishni topdi. Uchalasi ham barqaror va juda sezgir reaksiyalarni katalizlaydi. Bundan tashqari, ushbu fermentlar tomonidan katalizlangan reaktsiyalar natijasida hosil bo'lgan mahsulotlar, ishlatiladigan substratga qarab, faqat kolorimetrik usullar bilan emas, balki floresan usullar bilan ham aniqlanishi mumkin. Boshqa fermentlar kamroq qo'llaniladi. Bu ularning HRP va AP bilan solishtirganda past o'ziga xos faolligi bilan izohlanadi. Substratlar. Substratni tanlash, birinchi navbatda, yorliq sifatida ishlatiladigan ferment tomonidan belgilanadi, chunki ferment-substrat reaktsiyasi juda o'ziga xosdir. Substratga qo'yiladigan asosiy talablar: – konjugatdagi fermentni aniqlashda usulning yuqori sezuvchanligini ta’minlash; – ferment-substrat reaksiyasining aniq belgilangan (masalan, rangli) mahsulotlarini hosil qilish; - substrat xavfsiz, arzon, foydalanish uchun qulay va qulay bo'lishi kerak. Ko'pincha xromogen substratlar ishlatiladi, ular yo'q qilinganda rangli moddani hosil qiladi. Yuqori energiyali substratlardan foydalanish istiqbolli - floresan, xemiluminesans. Bunday substratlardan foydalanish nazariy jihatdan Elishayning sezgirligini ikki darajaga oshirishga imkon beradi. konjugat shakllanishi. Konjugat - bu ferment belgisi bilan belgilangan antigen yoki antikor. Konjugatning shakllanishi Elishayning muhim bosqichlaridan biridir. Konjugatni shakllantirishda ferment yorlig'ini kiritishning optimal usuli tanlanadi, shunda konjugatning ikkala komponenti ham o'zlarining biologik faolligini saqlab qoladilar: ferment - substrat bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyati va antigen yoki antikor - antigenlik va antigenni bog'lash. mos ravishda faoliyat. Belgilangan, yuqori darajada tozalangan antigenning mavjudligi raqobatbardosh usullardan foydalanishga imkon beradi. Bunday holda, immobilizatsiyalangan antikorlar bilan bog'lanmagan konjugatning faolligi oxirgi bosqichda o'lchanishi mumkin, bu yuvish jarayonidan qochadi va tahlilni yanada qulayroq qiladi. Ammo antigenlar fizik-kimyoviy xossalari va tuzilishi jihatidan xilma-xildir, demak, antigen bilan konjugat olishning universal usullarini ishlab chiqish mumkin emas. Bunday holda, antigen-ferment konjugatini olish alohida muammo hisoblanadi. Elishay uchun etiketli antikorlarni tayyorlash metodik jihatdan qulayroqdir. Fermentni immunokimyoviy faol oqsillar bilan konjugatsiya qilish turli usullar bilan amalga oshiriladi: kimyoviy o'zaro bog'lanish, ferment molekulasining AG yoki AT bilan kovalent bog'lanishi va kovalent bo'lmagan bog'lanishlar orqali birikmalar hosil bo'lishi, masalan, ulanish paytida. ferment va AG yoki AT o'rtasidagi immunologik, antigen-antikor o'zaro ta'siri orqali amalga oshiriladi. Konjugatlarni tayyorlash uchun eng ko'p qo'llaniladigan kovalent usullar. Bog'lanish reaktsiyasini tanlash ushbu oqsil molekulalarida mavjud bo'lgan funktsional guruhlarning turiga qarab belgilanadi. Fermentni antigen va antikor molekulalariga kiritish uchun ishlatiladigan reagentlar sifatida glutaraldegid, natriy periodat va boshqalar ishlatiladi. Glutaraldegid yordamida konjugatlarni olishning bir bosqichli va ikki bosqichli usullari mavjud. Enzimatik faolligi pasaygan (erkin fermentning 15 - 60%) har xil o'lchamdagi konjugatlar hosil bo'lishi mumkin. Olingan katta o'lchamdagi konjugat sinov moddasini aniqlashga sterik tarzda to'sqinlik qilishi mumkin. Nisbatan past molekulyar og'irlikdagi konjugatlar Fab fragmenti va bitta ferment molekulasidan iborat. Ikki bosqichli sintez natijasida, avvalo o'zaro bog'lovchi vosita bilan modifikatsiyalangan fermentni bosqichma-bosqich tayyorlash, uni izolyatsiya qilish, so'ngra antigen (antikor), molekulalar bilan o'zaro ta'sir qilish. immunoglobulin molekulasida 1-2 ferment molekulasini o'z ichiga olgan va yuqori fermentativ va immunologik faollikni saqlaydigan bir hil tarkib hosil bo'ladi. Biroq, hosil bo'lgan bunday konjugatlarning miqdori kichik (xren peroksidaza uchun u 5-10% ni tashkil qiladi). Fermentning uglevod komponentini natriy periodat bilan oksidlanishiga asoslangan immunoperoksidaza konjugatlarini olish usuli (peroksidazaning konjugat bilan bog'lanishi fermentning dastlabki miqdorining 70-90% ga etadi) eng katta amaliy qo'llanilishini topdi. Ishonchli konjugat quyidagi xususiyatlarga ega bo'lishi kerak: Yuqori antikor yo'lbars va antigenga yuqori yaqinlik, shuning uchun u yuqori suyultirishda ishlatilishi mumkin va shu bilan o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishni kamaytiradi; Ishchi naslchilikda etarlicha o'ziga xoslik; Polimerlardan monomerik shakllarning ustunligi, chunki polimerik shakllar o'ziga xos bo'lmagan plastmassaga yopishadi, natijada reaktsiyaning yuqori fon darajasi; Ferment va antikorlar orasidagi optimal molyar nisbat (optimal nisbat taxminan 1: 1); Konjugatning etarli fermentativ faolligi. Bu xususiyat asosan konjugatsiya shartlari va konjugatdagi ferment va antikor molekulalarining nisbati bilan belgilanadi. 5.3 Geterogen Elishay usullari. Heterojen Elishay (yoki qattiq fazali Elishay) analit ikki fazada bo'lgan usullarni o'z ichiga oladi. Immunokimyoviy reaktsiyaning tarkibiy qismlarini ajratish uchun qattiq faza (erimaydigan tashuvchi, odatda plastik) antikorlari yoki uning ustida immobilizatsiyalangan antigen ishlatiladi, bu reaksiyaga kirmagan komponentlarning oraliq mahsulotlarini olib tashlash uchun har bir bosqichda yuviladi. Immobilizatsiya kimyoviy yondashuvlar yordamida faollashtirilgan tashuvchiga antikorlarni (antijenlarni) kovalent bog'lash, shuningdek, qattiq polimerlar (masalan, polistirol plitalari) yuzasiga antikorlarni (antijenlarni) fizik adsorbsiyalash orqali amalga oshirilishi mumkin. Chet el adabiyotida bu yo'nalish Elishay testi yoki ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili deb ataladi. Misol sifatida ferment bilan belgilangan maxsus antikorlar va immobilizatsiyalangan antikorlardan foydalangan holda antigenlarni aniqlash uchun raqobatdosh bo'lmagan Elishay. Tahlil qilingan antigenni o'z ichiga olgan eritma immobilizatsiyalangan antikorlar bilan tashuvchiga qo'shiladi. Inkubatsiya davrida o'ziga xos antigen-antikor kompleksi hosil bo'ladi. Keyin tashuvchisi bog'lanmagan antijenlerden yuviladi va etiketli antikorlar qo'shiladi - konjugat. Bog'langan konjugat miqdori sinov namunasidagi antigen miqdori bilan to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir. Ikkinchi inkubatsiya va ortiqcha konjugatni olib tashlashdan so'ng, ferment ta'sirida rangi o'zgarib turadigan ferment uchun xromogen substrat qo'shiladi, ya'ni quduqlardagi eritmaning bo'yalishi bilan fermentativ reaktsiya paydo bo'ladi. Bo'yash darajasi ferment bilan belgilangan o'ziga xos antikorlar, ferment va shunga mos ravishda sinov antijeni soniga to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir. Quduqlardagi eritmaning optik zichligini ma'lum bir to'lqinda (ishlatilgan substratga qarab) o'lchash mikroplata o'quvchilari uchun moslashtirilgan maxsus spektrofotometrlar yordamida amalga oshiriladi. Namunadagi antigenning kontsentratsiyasi natijalarni eritmaning optik zichligining standart antigen eritmasi konsentratsiyasiga bog'liqligini kalibrlash egri chizig'i bilan solishtirish orqali aniqlanadi. Muayyan immunokompleksni aniqlash bosqichida antigen immobilizatsiyalangan va etiketlangan antikorlar molekulalari bilan bog'langanligi sababli, adabiyotda bu usul ko'pincha "sendvich" usuli (inglizcha sendvichdan) yoki ikki markazli ELISA usuli () deb ataladi. inglizcha ikki saytli tahlildan). Bu usul faqat yuzasida kamida ikkita antijenik determinantga ega bo'lgan antijenlarni tahlil qilish uchun ishlatilishi mumkin. Ko'p miqdordagi monovalent antijenlarni (dorilar, pestitsidlar va boshqalar) tahlil qilish uchun qabul qilinishi mumkin emas. Ushbu usulning asosiy afzalligi uning yuqori sezuvchanligidir. Ushbu usul bilan birikmalarni aniqlash chegarasi hozirgi vaqtda 10-21 mol darajali qiymatga etadi, bu namunadagi tahlil qiluvchi moddaning atigi 600 molekulasini aniqlashga to'g'ri keladi. Maksimal sezuvchanlik har bir immunologik reaktsiya muvozanat rejimida amalga oshirilganda erishiladi, bu o'rtacha 4-6 soatni tashkil etadigan tahlil davomiyligiga ta'sir qiladi. Misol sifatida ferment bilan belgilangan ikkilamchi antikorlar va immobilizatsiyalangan antijenler yordamida antikorlarni aniqlash uchun raqobatdosh bo'lmagan Elishay. Tekshiriladigan sarum immobilizatsiyalangan antigenga qo'shiladi. Inkubatsiyadan va bog'lanmagan antikorlarni yuvishdan so'ng, tahlil qilingan antikorlarga xos bo'lgan etiketli ikkilamchi antikorlar qo'shiladi. Ikkilamchi inkubatsiyadan va ortiqcha etiketli ikkilamchi antikorlarni olib tashlaganidan so'ng, tashuvchidagi ferment yorlig'ining tarkibi sarumdagi o'ziga xos antikorlarning konsentratsiyasiga mutanosib bo'ladi. Ushbu sxema antikorlarni aniqlash uchun eng keng tarqalgan ELISA usullaridan biridir, chunki u turli antijenlarga antikorlarni aniqlash imkonini beradi. Misol sifatida etiketli antijen va immobilizatsiyalangan antikorlardan foydalangan holda antigenni aniqlash uchun heterojen raqobatbardosh Elishay. Tashuvchida immobilizatsiya qilingan antikorlarga tahlil qilingan antigen va antigen-ferment konjugatining belgilangan konsentratsiyasini o'z ichiga olgan eritma qo'shiladi. Inkubatsiyadan so'ng, tashuvchi bog'lanmagan erkin va etiketli antigendan yuviladi va tashuvchida fermentativ faollik qayd etiladi, bu aniqlanayotgan antigen konsentratsiyasiga teskari proportsionaldir. 5.4 Gomogen Elishay usuli. Gomogen ferment immunoassay (HIFA) Elishayning eng uslubiy oddiy turi hisoblanadi. U o'rnatilganda, immun reaktsiyasi ishtirokchilaridan biri (odatda past molekulyar og'irlikdagi antijen) ferment bilan etiketlanadi va ferment faolligining o'zgarishini qayd etish orqali antigen-antikor kompleksining hosil bo'lish jarayoni nazorat qilinadi. Enzimatik faollikning bunday buzilishi ferment va substratning fazoviy ajralishi yoki immun kompleks hosil bo'lishi bilan birga ferment molekulasidagi konformatsion o'zgarishlar tufayli sodir bo'lishi mumkin. GIFA boshqa immunokimyoviy usullarga nisbatan bir qator muhim afzalliklarga ega. Birinchidan, yuqori ifoda (GIFA-dan foydalangan holda butun tahlil bir necha daqiqa va hatto daqiqalarning bir qismini oladi). Guruch.8 Bir hil ELISA variantlari(A - antigen (Ag) va antikor (Ab) ning o'zaro ta'sirida sterik to'siqlar tufayli ferment (F) va substrat (C) ning ajralishi ta'siri; B - ferment konformatsiyasining o'zgarishi ta'siri antigen-antikor kompleksining shakllanishi paytida). Ikkinchidan, usul bitta bosqichga ega va mashaqqatli va ko'p vaqt talab qiladigan yuvish bosqichlarini talab qilmaydi. Va nihoyat, uchinchidan, usul biologik yoki klinik namunaning minimal hajmini (8-50 µl) va miqdorini talab qiladi. Biroq, HIFA usuli juda muhim kamchilikka ega - u faqat past molekulyar og'irlikdagi antijenler uchun diagnostik test tizimlarini yaratish uchun ishlatilishi mumkin. Faqat bu holatda, antijen bilan o'zaro ta'sir qiluvchi antikor ushbu antigen bilan bog'liq bo'lgan ferment molekulasini samarali himoya qilishi yoki o'zgartirishi mumkin. Aynan shu munosabat bilan (boshqa usullarga nisbatan soddaligi va ravshan afzalliklariga qaramay) HIFA asosida faqat gormonlar, peptidlar, dorivor va giyohvand moddalar, ayrim past molekulyar oqsillarni aniqlash uchun diagnostika to'plamlari yaratildi. 5.5 "Sendvich" - antijenlarni aniqlash uchun Elishayning varianti. Elishayning ushbu varianti yordamida aniqlangan antijenler bir nechta antikorlarni bog'laydigan epitoplarga ega bo'lishi yoki bir xil o'ziga xoslikdagi takroriy, fazoviy ajratilgan epitoplarga ega bo'lishi kerak. Elishayning ushbu variantini o'tkazishda qattiq fazada adsorbsiyalangan yuqori o'ziga xos poli- yoki monoklonal antikorlar sinov namunasi bilan inkubatsiya qilinadi. Yuvish jarayonidan so'ng, bir xil antigenga ferment bilan belgilangan antikorlar (konjugat) quduqlarga qo'shiladi, so'ngra reaktsiyaning barcha boshqa bosqichlari amalga oshiriladi. Tahlilning har bir bosqichida o'ziga xos kompleks hosil qilish samaradorligi antigen-antikor reaktsiyasining bog'lanish konstantasiga bog'liq. Diagnostika usuli (ELISA) informatsiondir va juda qimmat emas, shuning uchun ko'plab laboratoriyalar o'z mijozlariga ushbu usulni taklif qilishadi (ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlil). Tadqiqot och qoringa o'tkaziladi, tahlil qilish uchun qon bemorning kubital venasidan olinadi. Elishaydan oldin chekmaslik va spirtli ichimliklarni iste'mol qilmaslik tavsiya etiladi. ELISA qon testi nima? Tananing yuqumli kasalliklarga qarshi turish qobiliyatini baholash va kasallikning bosqichini ko'rsatishga imkon beruvchi qon tahlili usullari orasida ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili (ELISA) muhim o'rinni egallaydi. Ushbu tadqiqotni o'tkazish qonning himoya funktsiyasi faoliyatini har tomonlama baholash va yuqumli patologiyalarda immunitet tanqisligi holatini, shuningdek, qon kasalliklari, otoimmün jarayonlar va gormonal muammolarni aniqlash imkonini beradi. Bu ma'lum antijenlarga (patogen agentlar) o'ziga xos antikorlarning (oqsil tabiatining himoya qon omillari) mavjudligini aniqlash imkonini beruvchi laboratoriya tekshiruvi. Eng muhim antikorlar orasida immunokomplekslar shaklida mavjud bo'lishi mumkin bo'lgan immunoglobulinlar mavjud. Immunoglobulinlar begona antijenlarning kiritilishiga javob sifatida yuzaga keladigan inson immunitetining murakkab neyrohumoral reaktsiyalari natijasida ishlab chiqariladi. Har bir patogen turi o'ziga xos antikorlarni ishlab chiqaradi. Ular antigen yoki patologik mikroorganizmni "bog'lash" orqali "antigen-antikor" kompleks birikmasini hosil qiladi, so'ngra neytrallanish, fermentativ liziz, fagotsitoz reaktsiyalari va organizmdan ajralib chiqadi.Ma'lum komplekslarning mavjudligi bilan Elishay usuli. bemorda mavjud bo'lgan patogen yoki zararli moddaning turini aniqlaydi. Shuni esda tutish kerakki, davolanish kursidan so'ng antikorlar tanamizda juda uzoq vaqt qolishi mumkin, hatto infektsiya tanamizni tark etgandan keyin ham, ya'ni. "serologik chandiq" deb ataladigan narsa qoladi. Misol uchun: tungi osmonda minglab yulduzlar bor. Bu yulduzlarning ko'pchiligi allaqachon o'lgan, ammo ularning nuri hali ham asrlar davomida bizni porlaydi. Aslida biz yulduzning izinigina ko'ramiz. Yorug'lik bor, lekin yulduzlar allaqachon o'tib ketgan. Ammo yorug'lik bo'lmasa, bu yulduz yo'qligini anglatmaydi. Antikorlar bilan ham xuddi shunday. Ularning mavjudligi tanadagi kerakli yuqumli agentning mavjudligini kafolatlamaydi. Antikorlarning yo'qligi infektsiya yo'qligini anglatmaydi. Agar Elishay tomonidan tahlil natijasi ijobiy bo'lsa, demak, siz aniqroq va qimmatroq usullar - PCR, bakteriologik madaniyatlar bilan infektsiyani izlashingiz kerak. Agar bir nechta mikroblar o'xshash antijenik tuzilishga ega bo'lsa, noto'g'ri ijobiy natija mumkin, keyin turli mikroblarga "o'xshash" antikorlar ishlab chiqariladi. Immunoglobulinlar nima Immunoglobulinlarning 5 ta asosiy sinflari - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE topilgan va o'rganilgan. qolganlarning roli hali to'liq ochib berilmagan va ular ilmiy tadqiqot bosqichida. Immunoglobulin A (IgA) ning asosiy vazifasi nafas yo'llarining shilliq pardalari, oshqozon-ichak trakti va siydik tizimining himoya funktsiyalaridir. Kasallikning o'tkir boshlanishi bilan ularni aniqlash mumkin emas. Ushbu himoya komplekslari faqat kasallikning boshlanishining 2-haftasidan boshlab, ba'zan keyinroq paydo bo'ladi. Immunoglobulin A ning asosiy qismi shilliq to'qimalarda to'plangan. Taxminan 80%. Qolgan antikorlar qonda aylanadi. Asosiy funktsiya mikroorganizmlarni zararsizlantirish va yo'q qilishdir. Kasallikning o'tkir namoyon bo'lishidan so'ng, bu immunoglobulinlarning miqdori kamayishni boshlaydi va kasallik boshlanganidan keyin 8 haftagacha butunlay yo'qoladi. Agar IgA keyinroq aniqlansa, bu surunkali jarayonni ko'rsatadi. Rivojlanayotgan patologiyaning o'tkir bosqichining asosiy va birinchi belgilari M sinfidagi immunoglobulinlar (IgM). Ular bezovtalik boshlanganining 5-kunida topiladi. Taxminan 6 hafta davomida qonda ularning mavjudligini aniqlashingiz mumkin. Keyin ular tezda yo'qola boshlaydi. Qolgan immun javob qonda G sinfidagi immunoglobulinlar (IgG) mavjudligini tavsiflaydi. Qonda bu omillarning paydo bo'lishi kasallikning boshlanishidan taxminan bir oy o'tgach aniqlanadi. Kelajakda ular ko'p oylar, yillar va hatto umr bo'yi aniqlanishi mumkin, bu kasallikning qaytishiga (qayta tiklanishiga) qarshi himoya funktsiyasini bajaradi va ba'zi hollarda patologiyaning ikkilamchi rivojlanishini imkonsiz qiladi. Agar immunoglobulin G miqdori yana ko'tarila boshlagan bo'lsa, u holda qayta infektsiyaga shubha qilish mumkin. Shunga o'xshash xulosani 2 haftalik interval bilan olingan ikki yoki uchta namunani o'tkazish orqali olish mumkin. Qon Elishay qanday amalga oshiriladi? Fermentga bog'liq immunosorbent tahlili uchun ko'p hollarda bemorlarning qoni ishlatiladi, ba'zida shishasimon to'qimalar, orqa miya kanali suyuqligi va amniotik suyuqlik olinadi. Qon kubital venadan in'ektsiya ignasi orqali shpritsga tushiriladi. Tadqiqot och qoringa o'tkaziladi. Shuni esda tutish kerakki, ayrim dori-darmonlarni qabul qilish tahlil natijasiga ta'sir qilishi mumkin. Qon topshirishdan oldin siz chekishdan, spirtli ichimliklardan voz kechishingiz kerak. Giyohvand moddalarni iste'mol qilish natijalarni buzishi mumkin. IgM, IgG, IgA immunoglobulinlarining salbiy qiymatlari bo'lsa, biz kasallikning yo'qligi yoki uning dastlabki bosqichi haqida gapirishimiz mumkin va minuslar bilan natija sezilarli vaqtdan keyin to'liq tiklanish bilan ham mumkin. Agar IgA va IgM aniqlanmasa va IgG ijobiy bo'lsa, ehtimol biz yuqumli kasallikdan keyin yoki emlashdan keyin shakllangan immunitet haqida gapiramiz. Agar IgA va IgM aniqlanmasa va IgG ijobiy bo'lsa, ehtimol biz yuqumli kasallikdan keyin yoki emlashdan keyin shakllangan immunitet haqida gapiramiz. IgG, IgA ning salbiy qiymatlari bilan IgM ning yuqori titri bo'lsa, o'tkir yuqumli kasallik bor degan xulosaga kelish mumkin. Immunoglobulinlar - IgA, IgM, IgG natijalarining bir vaqtning o'zida ijobiy ko'rsatkichlari mavjud surunkali kasallikning qaytalanishining o'tkir bosqichiga xosdir. Taqdim etilgan texnologiya nimani beradi: qonda gelmintlarning mavjudligini aniqlash; tanadagi boshqa patogenlarni izlash; sog'lig'ingizning yomonlashuvining sabablarini bilib olishingiz mumkin; davolash ham shu tarzda olingan tahlillarga asoslanadi; immunitet tizimining holatini kuzatishingiz mumkin. Yana bir yaxshi xususiyat - onkologik belgilarni, ularning kelib chiqishidan qat'i nazar, kuzatish qobiliyati, lekin ularning tanadagi mavjudligiga bog'liq holda, albatta. Ushbu test insonning reproduktiv tizimining holatini tavsiflash uchun ham javob beradi. Ba'zi oqsillar, gormonlar va peptidlarning mavjudligi bolani homilador qilish nuqtai nazaridan sherikning potentsialini, shuningdek, kelajakdagi homilaning kutilayotgan sifatini baholashga imkon beradi. Giardia uchun qon testi zamonaviy shifokorlar orasida juda mashhur amaliyotdir. Bundan tashqari, ushbu tadqiqot usuli o'ziga xos antijenler nuqtai nazaridan biotibbiyot tahlillari va miqdoriy statistika uchun ajoyib vositadir. Elishay qanday ishlatiladi? To'g'ri, bu murakkabroq holatlar, shuning uchun bunday tahlilning sifati ko'p jihatdan sinovni o'tkazadigan laboratoriya xodimlariga bog'liq bo'ladi. Texnologiyaning xususiyatlari va uning eski laboratoriya tadqiqotidan farqi: endi axlat namunasi o'rniga gelmintlarning mavjudligini aniqlash uchun qon ishlatiladi;
Namuna olish uchun venadan och qoringa olingan qon ishlatiladi, undan santrifüj yordamida tekshirish uchun sarum olinadi. Bundan tashqari, qon zardobini o'rganish jinsiy yo'l bilan yuqadigan bir qator kasalliklarni (sifilis, gerpes, xlamidiya), shuningdek, gepatit, qizamiq, qizilcha, parotit va toksoplazmozning barcha turlarini aniqlashi mumkin. Asosan, Elishay tahlilini o'tkazish uchun o'rganilayotgan biologik material qondir, ammo miya omurilik suyuqligi, shishasimon tananing tarkibi, amniotik suyuqlik va boshqalar. Immunoglobulinlar immunitet molekulalari bo'lib, ular organizmdagi ko'plab yuqumli agentlar va toksinlarni bog'lashi va ularni zararsizlantirishi mumkin. Bunday holda, immunoglobulinlarning eng muhim xususiyati ularning o'ziga xosligi, ya'ni o'ziga xos antigen bilan bog'lanish qobiliyatidir. Aynan shu xususiyat immunoglobulin uchun qon testini o'tkazish uchun ishlatiladi. Besh turdagi immunoglobulinlar mavjud, ammo eng ko'p o'rganilgan immunoglobulinlar A, M va G. M va G immunoglobulinlari qonda faoldir. A immunoglobulinlari shilliq qavatlar yuzasida bir xil to'siqdir, chunki ular ko'p miqdorda mavjud. Immunologik qon testi immunoglobulinlarning turini aniqlashga imkon beradi, buning natijasida Elishay nafaqat kasallikni tashxislash, balki ushbu kasallikning bosqichini aniqlash va kasallikning dinamikasini kuzatish imkonini beradi: kasallikning dastlabki 2 haftasida faqat A immunoglobulinlari aniqlanadi;
Virusli kasalliklar diagnostikasi: gepatit, herpes, Epstein-Barr virusi, sitomegalovirus va boshqalar; jinsiy yo'l bilan yuqadigan infektsiyalar: xlamidiya, gonoreya, trichomonas, mikoplazma, ureaplasma; sifilis; endokrinologiya (gormonlar darajasini aniqlash); o'simta belgilari (onkologik kasalliklar diagnostikasi); immunologiya (immunitet tanqisligi diagnostikasi); allergologiya (allergiya diagnostikasi va davolash). Serologik qon tekshiruvi - bu yuqumli kasalliklarni aniqlash va yuqumli jarayonning bosqichini aniqlash uchun ishlatiladigan laboratoriya qon tekshiruvi usuli. Serologik reaktsiya antikorlar va antigenlarning o'zaro ta'siriga asoslangan. Antigenlarni aniqlash mikroorganizmlarning jinsi va turlarini aniqlash uchun ishlatiladi. Ushbu tadqiqot usuli urologiya va venerologiyada qo'llaniladi. Serologik qon tekshiruvi uchun qon ertalab bo'sh qoringa venadan olinadi. Retsept bo'yicha ko'rsatmalar va Elishay tomonidan aniqlangan kasalliklar
Natijalarda buzilishlarga yo'l qo'ymaslik uchun och qoringa qon topshirish tavsiya etiladi va tadqiqotdan ikki hafta oldin (agar maqsad surunkali, yashirin yuqumli kasalliklarni tashxislash bo'lsa), antibiotiklar va antiviral preparatlarni qabul qilishni to'xtatish kerak. Elishay uchun ko'rsatmalarning to'liq ro'yxatini qamrab olishning iloji yo'q. Elishayning shubhasiz afzalliklari - bu usulning yuqori sezuvchanligi va o'ziga xosligi. Sezuvchanlik - kerakli moddaning namunadagi konsentratsiyasi past bo'lsa ham, uni tanib olish qobiliyati. Boshqa tomondan, o'ziga xoslik tashxisning to'g'riligini anglatadi: agar natija ijobiy bo'lsa, bu boshqalar emas, balki aniq antikor yoki antijen topilishi kerak degan ma'noni anglatadi. Elishay ko'p jihatdan mikrobiologiyaning "oltin standarti" ni - bakteriologik diagnostika usulini almashtirdi, uning davomida patogenni aniqlash uchun uni tanadan ajratib olish, so'ngra kulturani ozuqaviy muhitda probirkada bir necha kun davomida etishtirish kerak edi. kunlar. Har doim tahlil o'tkazilayotganda, shifokorlar kasallik belgilari bo'yicha mikroorganizmning kelib chiqishini taxmin qilib, bemorni "ko'r-ko'rona" davolashga majbur bo'lishdi. Elishay yordamida IgM ni aniqlash kasallikning dastlabki kunlaridayoq aniq tashxis qo'yish imkonini beradi. Ferment immunoassay ishlab chiqarishning yuqori darajasi inson omilining ta'sirini kamaytiradi, bu esa xato ehtimolini kamaytiradi. Zamonaviy laboratoriyalarda qo'llaniladigan test tizimlari va Elishay reaktivlarining aksariyati sanoat sharoitida ishlab chiqariladi, bu aniq natijani kafolatlaydi. Elishay usulining kamchiliklari
Afsuski, Elishayni o'tkazish uchun nimaga e'tibor berish kerakligini bilishingiz kerak: tahlil qilish texnikasi shifokorning kasallikning tabiati haqida oldindan taxmin qilishini nazarda tutadi. Shuning uchun tashxisni tasodifan "taxmin qilish" umidida bunday testni tayinlash mantiqiy emas. Yuqumli kasalliklar tashxisi qo'yilgan taqdirda, ferment immunoassay patogenni topa olmaydi va uning o'ziga xos xususiyatlarini aniqlay olmaydi: bu faqat bemorning qonida antikorlarning mavjudligini ko'rsatadi, bu bilvosita inson tanasida begona mikroorganizm mavjudligini ko'rsatadi. Elishay juda aniq, ammo arzon emas, shuning uchun siz uni oqilona ishlatishingiz kerak va malakali shifokor natijalarni sharhlashi kerak. Mumkin Elishay natijalari Tahlil mazmuniga qarab, shakl barcha antikorlar yoki salbiy yoki ijobiy reaktsiya belgilariga ega bo'lgan antijenler yoki natijaning miqdoriy qiymati (salbiy, zaif ijobiy, ijobiy yoki kuchli ijobiy) ko'rsatilgan jadval ko'rinishidagi ma'lumotlarni taqdim etishi mumkin. ko'rsatilishi kerak. Oxirgi variant tahlil qilingan namunada qancha antikor borligini aniqlaydi. Yana bir miqdoriy ko'rsatkich - bu foiz sifatida ifodalangan antikor avidligi indeksi. Bu yuqumli jarayonning boshlanishidan qancha vaqt o'tganligini ko'rsatadi (indeks qanchalik baland bo'lsa, shuncha ko'p). Bugungi kunda turli xil patologiyalarda o'ziga xos antikorlar va antijenlarni aniqlash imkonini beruvchi minglab turdagi Elishay test tizimlari ishlab chiqariladi. Shuning uchun bu tahlil deyarli barcha tibbiyot sohalarida qo'llaniladi. Elishay tomonidan qo'yilgan tashxis kasallikning etarli terapiyasi va samarali davolanishining kafolati hisoblanadi. Agar sizda zarur reagentlar mavjud bo'lsa va laboratoriyani yaxshi tashkil etsangiz, qon namunasi olingandan keyin 1-2 kun ichida tahlil natijasini olasiz. Ba'zi hollarda, agar shoshilinch javob kerak bo'lsa, bu muddat 2-3 soatgacha qisqartirilishi mumkin. Oxirgi Download 25.23 Kb. Do'stlaringiz bilan baham: 
|