Правила проведения лабораторных исследований в области ветеринарии. Получение, транспортировка и подготовка патологического материала для вирусологических исследований

Подготовка вируссодержащего материала для транспортировки и заражения лабораторных объектов.

Вирусологическое исследование сводится к выделению виру­са из патматериала, его серологической идентификации и подроб­ному изучению различных свойств (патогенность, антигенность, культивируемость в лабораторных условиях, морфологические признаки).

В каждом случае заболевания с подозрением на вирусную этиологию в первую очередь надо выделить возбудителя из патма­териала. В этой связи правильный отбор, упаковка, транспортировка и обработка материала имеют очень большое значение для успешной постановки диагноза на вирусное заболевание.
Материал для исследования. От заболевших, павших или вынужденно убитых животных его отбирают как можно быстрее после появления четких признаков болезни или не позднее 2...3 ч после их клинической смерти или убоя. Это связано с тем, что сразу после заболевания или в первые 1-2 дня болезни значитель­но ослабевает барьерная роль кишечника, что наряду с повышен­ной проницаемостью кровеносных сосудов, способствует распространению кишечной микрофлоры
При взятии материала для выделения вируса следует исхо­дить из патогенеза изучаемой инфекции (входные ворота, пути распространения в организме, места репродукции и пути выделе­ния). Так, при респираторных инфекциях для выделения вирусов берут носоглоточные смывы, мазки из носовой полости и глотки, соскобы трахеи и кусочки легкого трупов; при энтеровирусных — кал; при нейротропных — кусочки головного или спинного мозга; при дерматропных инфекциях — свежие поражения кожи и т.п., т.е. отбирают тот материал, в котором предполагается наиболь­шая концентрация вируса. Материалом для выделения вируса мо­гут служить различные экскреты и секреты, кусочки органов, кровь, лимфа и пр.
При вскрытии трупов животных материал отбирают при строгом соблюдении всех правил асептики и антисептики, чтобы не заразиться самому, не внести посторонних возбудителей в ис­следуемый материал и не допустить распространения инфекцион­ного начала.
Кровь берут из яремной вены, кончика хво­ста или уха, венозного сплетения глаз и т.д.
Для выделения вируса используют цельную дефибринированную, "лаковую" кровь (смесь крови с дистиллированной водой в отношении 1:1), либо отдельные элементы крови (эритроциты, лейкоциты, плазма, сыворотка).
Для обнаружения противовирус­ных антител кровь берут у одного и того же животного дважды с интервалом в 2...3 недели (для получения парных сывороток в объеме не менее 5,0 мл каждой).
Смывы со слизистой оболочки носовой полости, глаз, с зад­ней стенки глотки, прямой кишки и клоаки у птиц берут сте­рильными ватными тампонами и погружают их в пенициллино­вые флаконы или пробирки, содержащие 3-5 мл соответствующей жидкости. Наиболее часто для этого используют раствор Хенкса или среды для культур клеток (ГЛА, 199, Игла) с антибиотиками (пенициллин, стрептомицин по 500 ЕД и нистатин по 20 ЕД на 1 мл среды) с белковым стабилизатором, например, 0,5%-ным раствором желатина или 0,5...1%-ным раствором альбумина бычьей сыворотки. Присутствие стабилизаторов необходимо для предотвращения быстрой инактивации некоторых вирусов, на­пример, вируса парагриппа.
При взятии материала из носоглотки можно использовать при­бор, сконструированный Томасом и Стоком. Он состоит из трубки диаметром 9 мм и длиной 30 см, внутри которой помещается вторая тонкая трубка с нержавеющим стержнем, оканчивающимся нейлоновой щеткой. Прибор вводят глубоко в носовые ходы (хоаны) или в горло через носовой ход, выдвигая щеточку, а затем вновь задвигая ее в трубку перед тем, как вынуть прибор из ор­гана. Щеточку тщательно отмывают от слизи и клеток в 2 мл жидкости (раствор Хенкса).
Слюну отбирают при наличии признаков поражения рото­вой полости или слюнных желез. Вытекающую изо рта слюну можно собрать прямо в пробирку. Если ее выделяется мало или она не вытекает, необходимо пропитать слюной стерильный там­пон на палочке, а затем поместить в пробирку с небольшим коли­чеством раствора Хенкса и закрыть резиновою пробкой. Для уси­ления слюноотделения животному можно ввести пилокарпин из расчета 0,02...0,05 г на 1 кг массы.
Мочу отбирают при помощи катетера в стерильную посуду.
Фекалии берут из прямой кишки при помощи шпателя или палочкой и помещают в стерильную пробирку или пенициллиновый флакон.
Везикулярную жидкость собирают шприцем или пастеров­ской пипеткой в стерильную пробирку.
Стенки афт, корочки с поверхности кожи снимают пинце­том.
Спинномозговую жидкость берут асептически путем обычной пункции.
В качестве патматериала используют кусочки органов объе­мом несколько см³ и массой 10-20 г, которые:
а) имеют видимые отклонения от нормы по форме, размеру, цвету, консистенции, наличию необычных образований;
б) могут быть поражены и содержать вирус;
в) наиболее часто содержат вирус — печень, селезенка, лег­кие, головной мозг, лимфатические узлы, почки.
Таблица 1.