Техника приготовления мазка, окраска простым методом

Заполняется протокол в форме таблицы по изучению культуральных, морфологических и тинкториальных свойств выделенных на плотной среде микроорганизмов.

Патологичес кий материал и питательная среда	Номер колонии	Окраска по Граму	Размер	Форма	Цвет	Поверхность	Консистенция	Состав	Края	Тип колонии (S , R, M,)	Выделенная культура
Посев вохдуха методом седиментации на МПА
Посев гноя в ЖСА
Посев кала в среде Эндо

Лабораторная работа № 7
«ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ (ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ)»
(3 ДЕНЬ)
Цель работы.
Ознакомление студентов с идентификацией чистых культур аэробных и анаэробных бактерий по ферментативным свойствам микроорганизмов для определения рода бактерий.
Педагогические задачи:

• 
  объяснить значение изученияферментативых свойств микроорганизмов в идентификации чистой культуры;
  
• 
  объяснить и показать изменения углевод и белок-содержащих сред (Клигер, Рессель, МПА) под действием ферментов микроорганизмов.
  

Результаты занятия
Студент должен знать:

• 
  ферментативные свойства аэробных и анаэробных бактерий;
  
• 
  среды для изучения ферментативных свойств и методы посева (Клигер, Рессель, МПА);
  
• 
  интерпретация полученных результатов.
  

Студент должен уметь:

• 
  определить ферментативные свойства аэробных и анаэробных бактерий в питательных средах;
  
• 
  использовать на практике полученные результаты.
  
• 
  Лабораторная работа. Изучение биохимических свойств бактерий в средах Гисса и Клигера.
  
• 
  
• 
  Цель: Выделениечистых культур микроорганизмов и идентификация их по биохимическим свойствам.
  
• 
  
• 
  Необходимое оборудование: Среда Клигера, культуры, выращенные в этой среде (по 2 набора), спиртовка, пипетка (по 6), термостат, микроскоп (2), этиловый спирт 96⁰, набор красок (4 набора). Для демонстрации цветные схемы результатов определения биохимических свойств бактерий.
  
• 
  
• 
  Шаги выполнения:
  

  №	Выполняемая работа	Рисунки определения ферментативных свойств микроорганизмов	Выполнил полностью и точно (балл)
  1	Учет результата посева чистой культуры в трехсахарную среду		10
  2	При учете биохимических свойств обратить внимание на изменения в среде расщерление глюкозы (до кислоты без образования газа, с образованием газа), расщепление лактозы, записать результаты в тетрадь		15
  3	Определить способность кишечных бактерий образовывать Н2S. Кишечные бактерии в среде Клигера (контроль среды Клигера, среда Клигера с образование Н2S)		15
  4	Для дальнейшего изучения ферментативных свойств посев культуры из Клиглера в короткий ряд Гисса (для исследования ращепления глюкозы, лактозы, сахарозы, маннита, мальтозы и в МПБ для изучения протеолитических свойств - образование индола и Н2S)		15
  5	Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий брюшного тифа)		15
  6	Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий паратифа А)		15
  7	Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий паратифа В)		15
  Итого			100

• 
  
• 
  
• 
  Лабораторная работа 2. Тесты на каталазу и оксидазу.
  
• 
  
• 
  Цель: Изучение метаболических свойств выделенной чистой культуры бактерий для идентификация их.
  
• 
  
• 
  Необходимое оборудование: Исследуемая культура микроба в МПА (E.coli, P.aeruginosa) – по 2 пробирки, спиртовки, пипетки, предметные стекла (по 6), 1-3 % ный пероксид водорода (по 3-4 мл в одной пробирке), бумажный диск с фенилендиамином ( во флаконе), резиновые пречатки, этиловый спирт 96⁰.
  
• 
  
• 
  Шаги выполнения:
  
• 
  

№	Выполняемая работа	Не выполнил (балл)	Выполнил полностью и точно (балл)
1	Приводится в порядок место работы и зажигают спиртовку, предметное стекло протирается ватным шариком и на спиртовке обезжиривается.	0	10
2	Предметное стекло кладется на мостик лотка и с помощью пипетки капают 1 каплю 3 % раствора пероксида водорода.	0	15
3	Берут чистую культуру E.coli из питательной среды в пробирке с помощью петли и перемешивают в 3% ый раствор пероксида водорода	0	15
4	Каталаза E.coli расщепляет водород пероксид на Н₂О и О₂. Выделение пузырьков кислорода показывает наличие каталазы у бактерий.	0	10
5	Записывается результаты в тетрадь и место работы приводится в порядок.	0	10
6	Для определения оксидазной активности у культуры P.aeruginosa берутся 2 диска с фенилендиамином и кладут на предметное стекло	0	15
7	На первый диск капают бульонную культуру P.aeruginosa, на второй на диск культуру E.coli. Бактерии P.aeruginosa расщепляют фенилендиамин и бумага окрашивается в синий цвет. Из-за отсутствия оксидазной активности у E.coli цвет диска не изменяется.	0	15
8	Записывается результаты в тетрадь и место работы приводится в порядок.	0	10
	Итого	0	100

Результаты идентификации выделенной чистой культуры по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам ( форма протокола)

Штамм №

Морфология

Окрашивание

Каталаза

Оксидаза

Характер роста

Биохимические свойства

Род культуры или название

R

S

На бульоне

Способность расщеплять

Способность образовать

глюкоза

лактоза

сахароза

маннит

индол

H₂S

плазмокоагулаза

гемолизин

• 
  

Лабораторная работа № 8
«ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ»
Цель работы.
Повышение эффективности лечения инфекционных заболеваний.
Педагогические задачи:

• 
  показать значение использования антибиотиков в медицинской практике и определение к ним чувствительности возбудителей.
  
• 
  объяснить значение и механизмы появления резистентных бактерий к антибиотикам.
  
• 
  Результаты занятия
  

Студент должен знать:

• 
  методы получения и использования антибиотиков и их значение в медицинской практике;
  
• 
  механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы;
  
• 
  понять значение и механизмы появления резистентных бактерии к антибиотикам;
  
• 
  оценивать механизмы, значения и современные методы определения чувствительности к антибиотикам.
  

Студент должен уметь:

• 
  определять чувствительность бактерии к антибиотикам;
  
• 
  выполнить интерпретацию результатов антибиотикорезистентности
  

Лабораторная работа.
Определение чувствительности бактерии к антибиотикам по методу Hexa Discs (6 отдельных дисков прикрепленные к центральному пластику) предложенная компанией Хай Медиа.
Цель: Рациональный выбор для профилактики и повышения эффективности лечения инфекционных заболеваний.
Необходимое оборудование: чашка Петри с питательной средой, исследуемая чистая культура микробов, набор Hexa Discs, этиловый сприт 70 -96⁰, иммерсионное масло, предметные стекла, фильтровальные бумаги, спиртовка, набор для окрашивания по методу Грам, пинцет, линейка (РW-297), штатив, лоток, чистая вода в колбе, физиологический раствор, микроскоп.
Шаги выполнения:

№	Выполняемая работа	Фотографии техники выполнения	Выполнил полностью и точно (балл)
1. 1	Готовится 1-1,5 млярд/мл суспензия чистой культуры микроба и сеют в чашечки Петри с МПА по методу “газон”. Посев микроба в чашечке Петри оставляется на 10 минут		20
2	Стерилизуют пинцет над пламенем спиртовки. Открывают набор Hexa Discs (или набор дисков) и вынимается диск в виде ромашки с антибиотиком (с разными концентрациями одного антибиотика или разными антибиотиками) и закрывают его крышку