Техника приготовления мазка, окраска простым методом

Студент должен уметь выполнить:

• 
  определение фаговаров бактерий;
  
• 
  использование фагов в практической деятельности для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
  

Лабораторная работа.Определение титра бактериофага Т4 методом послойного агара.

• 
  Цель: Обучить выделению бактериофага и определению его титра.
  
• 
  Необходимое оборудование:бактериофагТ4, агарная культура E. coli, стерильные флаконы или пробирки - 10шт., 3 мл ые пробирки с полужидким агаром - 10 шт., стерильная дистиллированная вода, спиртовка, резиновая груша, стерильные пипетки 12-15 шт., резиновая перчатка, физиологический раствор. Работа проводится в стерильных условиях.
  
• 
  Шаги выполнения:
  

№	Выполняемая работа	Схема выполнения	Выполнил полностью и точно (балл)
1	С помощью пипетки в каждую пробирку наливают по 9 мл дистилированной воды и записывют титр разведения на пробирках с 10^-1 до 10^-10		10
2	С помощью пипетки в стерильные пробирки наливают по 3 мл 0,7%ый полужидкого агар и надписывют титр разведения с 10^-1 до 10^-10		10
3	Берут 1 мл суспензии бактериофага с помощью пипетки и добавляют в 10^-1 стерильную воду во флаконе и перемешивают		10
4	С помощью пипетки берут 1 мл смеси бактериофага и воды из первой пробирки и наливают во вторую пробирку и так титруют до 10^10, каждый раз хорошенько перемешивая. При взятии материала из пробирки для каждого разведения используют стерильные пипетки		15
5	Наливают во все флаконы 0,5мл суспензии, проготовленной из агаровой культуры E. сoli (специфичная для Т-4 фага)		15
6	В пробирки с полужидким агаром наливают суспензию из E. сoli и Т-4 фага по 0,2 мл и осторожно перемешивают между ладонями		15
7	Их наливают в плотный агар в чашках Петри, в которых подписаны разведения и медленно вращают чашечки для равномерного распространения полужидкого агара по поверхности плотного агара.		10
8	Посевы ставят в термостат на 18-24 ч, затем изучают результаты. Определяют титр фага Т-4 и записывают в тетрадь.		15
ИТОГО				100

Определение фаготипа культуры стафилококка
- посев методом газона в питательную среду суточной чистой культуры стафилококка
-немного подсушивается в термостате
-в каждый квадратик вливаем пипеткой опеределенные фаги свойственные 4 группам.
- инкубируем в термостате сутки
-смотрим в каком квадрате происходит лизис
Определение фаготипа стафилококка производим по образовавшемуся лизису
Набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (Мартена, Хоттингера или мясопептонном рН — 7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% СаСО. Добавляют 1 мл бульона, получают разведение фага 1 : 10, из которого готовят два рабочих разведения, соответствующие тест разведению (TP), и 100 TP разведение, соответствующее 1 TP, указанному на этикетке фага. Первое рабочее разведение фатов (1 TP) следует готовить заново каждые 7—10 дней.