Universum: химия и биология

Анализ активности гемагглютинации 
Анализ активности гемагглютинации проводили 
путем последовательного разбавления белкового об-
разца 0,1 М Трис-HCl буфером (pH-7,6), содержащим 
0,15 М NaCl, с последующим добавлением фермента-
тивно обработанных эритроцитов. Результат опреде-
ляли как соотношение наибольшего разбавления, 
способное агглютинировать эритроциты. В иссле-
довании на гемагглютинины экстракта цианобактерий 
использовались эритроциты кролика, обработанные 
трипсином, поскольку по литературным данным 
цианобактерии чувствительны к ферменту лектин-
трипсину [19]. 
Помимо визуального наблюдения, мы также 
наблюдали процесс гемагглютинации с помощью мик-
роскопа (рис. 2). Тот факт, что эритроциты со време-
нем слипаются и оседают, указывает на то, что 
происходит процесс гемагглютинации. 
Для учета серологических реакций использовали 
микроскоп OLYMPUS BX 41 (Япония). 
Очистка лектинов 
Первичное выделение лектинов осуществляли пу-
тем высаливания белков кристаллическим (NH₄)₂SO₄ 
[22] из водной фазы гомогенатов цианобактерий в 
фосфатно-солевом буфере (PBS). 
Для очистки препарата лектина использовали 
гель-фильтрацию на сефадексе G-100 [17] и электро-
фореза в полиакриламидном геле в присутствии 
додецилсульфата натрия (SDS-PAGE). 
В полученных фракциях измеряли концентрацию 
белков спектрофотометрическим методом в полосах 
206 и 280 нм и концентрацию лектинов с помощью ре-
акции гемагглютинации. 
Влияние показателей pH и температуры
на активность лектина 
Влияние показателей pH на активность лектина 
путем инкубации очищенного лектина при 25° C в те-
чение 30 минут в 0,1 M буферах с различными показа-
телями pH определялась реакцией гемагглютинации. 
Для этого использовали буферы цитратфосфата с 
pH=4,0-7,5 и Трис-HCl с pH=7,0-9,0. Для определения 
pH стабильности, очищенный лектин (50 мкл) инкуби-
ровали с буферами (50 мкл) при 25 °C при различных 
pH, затем образцы нейтрализовали, а активность про-
веряли через 30, 60 и 90 мин. Остаточная активность 
определяли в стандартных условиях анализа. Актив-
ность гемагглютинации измеряли также в интервале 
температур от 20 до 100°C. Термическая стабиль-
ность проверяли предварительной инкубацией 
очищенного лектина при заданных температурах 

---

№ 5 (107)
май, 2023 г.
58 
через 10, 30, 40 и 60 минут инкубации и анализиро-
вали на гемагглютинацию в стандартных условиях 
анализа [4].