Olingan turlararo duragaylarni PCR yordamida tahlil qilish . Gibrid sinov
Olingan turlararo patlıcan duragaylari yordamida ishlab chiqarilgan
ISSR (oraliq ketma-ketlik) yordamida PCR (polimeraza zanjiri reaktsiyasi)
takroriy - mikrosatellit joylari bilan yonma-yon joylashgan DNK fragmentlarining polimorfizmi
ketma-ketliklar) va IRAP (inter retrotransposon kuchaytirilgan polimorfizm - polimorfizm)
teskari terminal mintaqalari yonidagi DNK fragmentlari fizikasi
kami retrotransposon) primerlari.
Ota-ona chiziqlari va gibrid patlıcan o'simliklarining umumiy DNKsi ajratilgan
kichik yaproqlardan (Edvards va boshq. (1991) tasvirlangan) kichik o'zgarishlar bilan
yami: o'simlik namunalari ekstraktsiya tamponida to'g'ridan-to'g'ri trituratsiya qilingan, keyin
bu orqali quvurlar termostatda 20 daqiqa davomida 65 ° S haroratda inkübe qilindi. Kuchaytirish
DNK ekstraktsiyasi × 1 Taq buferini o'z ichiga olgan 25 mkL reaktsiya aralashmasida amalga oshirildi
(50% glitserol, 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.5%
Tween 20) tegishli to'plamdan, 1,5 mM MgCl 2 ; Har bir dNTP 0,2 mm; 20 soat
astar; 0,2 birlik Taq polimeraza (Fermentas, Litva) va 10 - 50 ng DNK. Ishlatilgan
Biz MyCycler termal velosipedini (Bio-Rad, AQSh) quyidagi rejimda ishladik: dastlabki
denatürasyon - 4 daqiqa (94 ° C da); denatürasyon - 94 ° C da 40 soniya; asosiy tavlash
192
ariq - 40 soniya (harorat primerlarga qarab 50 dan 62 ° S gacha o'zgargan);
DNK sintezi - 72 ° C da 1 daqiqa, 30 tsikl; yakuniy cho'zish - 10 minut
72 ° S DNK bo'lmagan PCR aralashmasi nazorat sifatida xizmat qildi. Kuchaytiruvchi mahsulotlar
0,5% TBE tamponli (0,89 M Tris) 1,5% agarozli gelda elektroforez bilan ajratilgan
0,89 M borat kislotasi, 20 mM EDTA, pH = 7,5), etidiy bromid bilan bo'yalgan; qayta
natijalar CN-1500 gel hujjatlashtirish tizimi yordamida suratga olindi
Darkroom (VilberLourmat, Frantsiya). Kuchaytirish uchun sakkizta ISSR tubi ishlatilgan.
CJSC Syntol (Rossiya) da sintez qilingan choralar va 5 ta IRAP primerlari.
Do'stlaringiz bilan baham: |