Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш Вирусларни ажратиб олишдаги 1-ишлар

Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш

Вирусларни ажратиб олишдаги 1-ишлар

• Фитопатоген вирусларнинг ҳозирда 35-45% ажратиб олинган ва уларнинг методлари ишлаб чиқилган.
• 1898-йилда Бейеринк ТМВ ни тоза ҳолда ажратиб олган.

Босқичлари:

• 1- босқичда ҳужайра элементлари ажратилади.
• 2- босқичда вирусга ўхшаш моддалар ажратилади.

• Кимёвий
• этанол,
• аммоний сулфат,
• полиэтиленгликол
• Физик-кимёвий
• Аёвсиз
• Иссиқлик
• Совуқ
• Беаёв
• Гел хроматографияси
• хроматографияси
• Сентрафугалаш
• Электрофорез

Методлари:

Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш

Ишдан мақсад.

Юқори ион кучига чидамли вирусларни аммоний

сульфати ёрдамида қисман тозалаш методи билан таништириш.

Керакли материаллар.

• ТМВ билан касалланган тамаки барги (500 г);
• 0,1М фосфат буфери, рН 7,0-7.5;
• 0,1 н НС1;
• 0,1 н NaOH;.
• ЭДТА;
• аммоний сульфат;
• хлороформ;
• вирус экстракциягида ишлатиладиган асбоб- ускуна ва идишлар.

Ишнинг бориши:

Вирус билан касалланган ўсимлик барги 1:1 нисбатдаги 0,1М ФБ (рН 7,5) билан гомогенизация қилинади.
1- босқич
касалланган ўсимлик барги
Фосфат буфери
2- босқич
Ишлов берилади
20%
аммоний
сулфат
3- босқич
30 минут давомида совутгичда тутилади
3 минг айл/тезлигида 20 минут давомида центрифуга қилинади.
Чўкма ости суюқлиги ташланади
Чўкма усти суюқлиги
25%
аммоний
сулфат
4- босқич
Шундан сўнг 60 минут кристаллар ҳосил бўлиши учун сақланади. Вирусли идиш вирус тўлиқ кристалланиши ва чўкиши учун кечасига совутгичда қолдирилиб кетилади.
сифон ёрдамида чўкма усти
суюқлиги ажратилади.
6 - 8 минг айланиш тезлигида 15- 20 минут центрифуга қилинади
5- босқич
ташланади
Чўкма усти суюқлиги
чўкма усти суюқлиги
чўкма ости суюқлиги
Кейинги босқичучун юборилади
чўкма ости суюқлиги
100мл 0,01М фосфат буферига, рН 7,5 эритилади.
6- босқич
7- босқич
Диализ қопчасига вирусли суспензияни солингандан сўнг уни 3- 5 литрли сув ёки буфер эритмаси тўлатилган идишга тушириб қўйилади. Сувли идиш магнитли айлантиргичга ўрнатилади. Диализ 24 соат давомида олиб борилиб, шу даврда 3 марта диализ суви (буфер) алмаштирилади.
8- босқич
препарат 10 минут 15-18 минг айл/тезлигида центрифуга
қилинади
чўкма усти суюқлиги ташланади
чўкма усти суюқлиги 9-босқичга юборилади
9- босқич
чўкма усти суюқлиги чўктирилади
25%
аммоний
сулфат
20-30 минутдан сўнг 20 минут давомида 6минг айл/тезлигида центрифуга қилинади.
диализат
сентрафугат
ташланади
Филтр қоғозда қуритилади
10- босқич
11- босқич
Вирусли чўкма
Вирусли чўкма
чўкмани 20 мл 0,01М фосфат буферида (рН 7,0- 7,5) эритилади
15-18 минг айланиш тезлигида центрифуга қилиниб, эримаган қисмидан ажратиб ташланади.