5-маъруза Мавзу: Ферментларни таъсир этувчи механизмлари

Намуна олиш усулига кўра ферментларни таҳлил қилиш икки гуруҳга бўлиниши мумкин: доимий таҳлиллар, бу ерда таҳлил фаолликни доимий ўрганилади. Узлуксиз таҳлиллар, бу ерда намуналар олинади, реакция тўхтатилади ва кейин субстратлар/маҳсулотлар консентрацияси аниқланади.

Доимий таҳлиллар

Спектрофотометрик

Спектрофотометрик таҳлилларда сиз таҳлил эритмаси қанча ёруғлик ютишидаги ўзгаришни ўлчаш орқали реакциянинг боришини кузатасиз. Агар бу ёруғлик кўринадиган ҳудудда бўлса, сиз таҳлил рангининг ўзгаришини кўришингиз мумкин ва булар колориметрик таҳлиллар деб аталади. Субстрат сифатида тетразолиум бўёғидан фойдаланган ҳолда редокс таҳлили колориметрик таҳлилга мисолдир.

UV нурлари тез-тез ишлатилади, чунки NADH ва NADFH умумий коэнзимлари ултрабинафша нурларини ўзларининг қисқарган шаклларида ўзлаштирадилар, лекин оксидланган шаклларда эмас. Шунинг учун субстрат сифатида NADH дан фойдаланадиган оксидоредуктаза коэнзимни истеъмол қилганда 340 нм тўлқин узунлигида UV адсорбсиясининг пасайишини кузатиш орқали текширилиши мумкин.

UV нурлари тез-тез ишлатилади, чунки NADH ва NADFH умумий коэнзимлари ултрабинафша нурларини ўзларининг қисқарган шаклларида ўзлаштирадилар, лекин оксидланган шаклларда эмас. Шунинг учун субстрат сифатида NADH дан фойдаланадиган оксидоредуктаза коэнзимни истеъмол қилганда 340 нм тўлқин узунлигида UV адсорбсиясининг пасайишини кузатиш орқали текширилиши мумкин.

Тўғридан-тўғри ва боғланган таҳлиллар

Фермент реакцияси ёруғликнинг адсорбсиясини ўзгартирмаса ҳам, уланган таҳлил ёрдамида фермент учун спектрофотометрик таҳлилдан фойдаланиш мумкин. Бу эрда бир реакция маҳсулоти бошқа, осон аниқланадиган реакциянинг субстрати сифатида ишлатилади. Мисол учун, глюкоза-6-фосфат дегидрогеназа ёрдамида глюкоза-6-фосфат ишлаб чиқаришни NADH ишлаб чиқариш билан боғлаш орқали таҳлил қилиниши мумкин бўлган гексокиназа ферменти учун бирлаштирилган таҳлил кўрсатилган.

Флурометрик

Флуросенс - молекула бошқа тўлқин узунликдаги ёруғликни ютгандан кейин бир тўлқин узунлигидаги ёруғлик чиқаради. Флорометрик таҳлиллар фермент реакциясини ўлчаш учун маҳсулотдан субстратнинг флуросенсидаги фарқдан фойдаланади. Ушбу таҳлиллар, умуман олганда, спектрофотометрик таҳлилларга қараганда анча сезгир, аммо ёруғлик таъсирида ифлосланишлар ва кўплаб люминестсент бирикмаларнинг беқарорлиги туфайли қийин кечади.