9-laboratoriya ishi solod tarkibidagi amilolitik ferment faolligini aniqlash Ishning maqsadi

Ishni bajarish tartibi
: 
Kalibrovkali egri chiziq tuzish
. 
Kalibrovkali grafik tuzish uchun 0,1 % li eruvchan kraxmal eritmasi ishlatiladi 
kraxmalni birlamchi eritmasini quyidagi sxema bo’yicha kamaytirib tayyorlanadi. 
- eritma № 1: 2 ml (tekshirilayotgan eritma, 1 mg/ml); 
- eritma № 2: 9 ml (tekshirilayotgan eritma) + 1 mlsuv; 
- eritma № 3: 8 ml (eritma № 2) + 1 mlsuv; 
- eritma № 4: 7 ml (eritma № 3) + 1 mlsuv; 
- eritma № 5: 6 ml (eritma № 4) + 1 mlsuv; 
- eritma № 6: 5 ml (eritma № 5) + 1 mlsuv; 
- eritma № 7: 4 ml (eritma № 6) + 1 mlsuv; 
- eritma № 8: 3 ml (eritma № 7) + 1 mlsuv; 
- eritma № 9: 2 ml (eritma № 8) + 2 mlsuv; 
- eritma № 10: 2 ml (eritma № 9) +2 mlsuv. 
Probirkalar ichidagini aralashtiriladi(probirkalarda 2 ml dan eritma qolishi kerak). 
Har bir probirkaga 2 ml dan yodni ishchi eritmasidan qo’shamiz. (0,1 n HCl da 
tayyorlanadi). Probirka ichidagini aralashtirib, hosil bo’lgan kraxmal yod kompleksini 
optik zichligini fotoelektrokolorimetrda, α = 670 nm o’lchaymiz. 

---

O’lchashni och rangli eritmadan boshlaymiz.Kontrol namuna uchun shu reaktivlar 
ishlatiladi. Faqat kraxmal o’rniga distirlangan suv ishlatiladi. Hosil bo’lgan natijalar 
quyidagi jadvalga yoziladi va kalibrovkali egri chiziq tuziladi. 
Ko’rsatkichlar 
Natijasi 
Kraxmal,mg/ml 
Optik zichlik 
Solod fermentlarini ajratib olish. α – amilazani solod ferment kompleksining asosiy 
eritmasidan α – amilazani inaktivlashtirish (aktivligini yo’qotish) bo’yicha ajratiladi. 100 
ml hajmdagi kolbaga 20 ml solodning asosiy eritmasidan solib, 15 minut davomida 70 
0
C 
haroratda qizdiramiz. α – amilaza shu haroratda inoaktivlashadi. Qizdirilgan eritmani 
sovutamiz va α – amilazani aktivligini aniqlash uchun ishlatamiz. α – amilazani 
aktivligini pH 5,5....5,8 bo’ladi, sovutilgandan keyin eriitmaga 4 ml pH 5,6 fosfatli bufer 
qo’shiladi. 
α – amilaza solod sutidan (solodovaya vo`tyajka) α – amilazani nordon muhitda 
inaktivlashtirish yo’li bilan ajratiladi. 100 ml hajmli kolbaga 20 ml solodni asosiy 
eritmasi solib, muzli hammomda 10 minut davomida ushlab unga 1 ml 0,1 n li HCl 
eritmasini qo’shamiz. Hosil bo’lgan eritmani muz hammomida 15 minut qoldiramiz va 
unga 3 ml pH 6,0 fosfatli bufer qo’shamiz (α – amilaza uchun optimal pH)