Академии наук т. П. Побежимова, А. В. Колесниченко, О. И. Грабельных
Download 1.37 Mb. Pdf ko'rish
|
pobezhimova полярография
|
1.1
ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ Получение функционально активных митохондрий из растений связано с рядом определенных трудностей. В первую очередь, к ним относится наличие плотных и жестких клеточных оболочек, вызывающих механические повреждения при растирании клеток. Отрицательную роль играют кислая реакция клеточного сока, выделяющегося в процессе гомогенизации ткани, а также содержащиеся в значительном количестве во многих растительных клетках фенольные соединения, являющиеся разобщающими агентами и ингибиторами. Другие особенности растительных тканей, например высокое содержание крахмала, хлорофилла, масел и т.д., также оказывают влияние на качество и чистоту изолированной митохондриальной фракции. Поэтому для получения интактных митохондрий в каждом конкретном случае в 12 зависимости от объекта и его физиологического состояния необходимо подбирать оптимальные условия выделения органелл. Рис. 4. Криостат для выделения интактных митохондрий и белков Процедура выделения митохондрий включает четыре этапа: 1) гомогенизация; 2) отделение митохондриальной фракции методом дифференциального центрифугирования; 3) очистка полученной фракции путем повторного промывания; 4) определение чистоты и качества полученного препарата митохондрий. Все операции по выделению митохондрий должны проводиться в строго контролируемых условиях, при температуре 0-4 0 С, для чего необходимо иметь криостат (Рис. 4) и рефрижераторные центрифуги. Во время всей процедуры выделения органелл как растворы, так и посуда должны находиться в воде со льдом. Прежде чем приступать к практической работе, |
