Фармамакологик биокимё

Машғулот N24
Пироузум кислотасини =он ва ты=ималарда Фридеман ва Хауген
быйича ани=лаш
Пироузум (пируват) кислотаси углеводлар алмашинувининг марказий
метаболитларидан бири щисобланади. Глюкоза ва гликогенни парчаланиш
жараёнида, сут кислотаси ва бир =атор аминокислоталар глицериндан щосил
былган пироузум кислотаси организм эхтиёжига кыра щужайраларда ацетил-
КоА гача оксидланиб, Кребс циклига кириши ёки бош=а моддаларга (сут
кислотаси, оксало ацетат, сирка кислотаси, амино кислоталар ва
б.=.)айланиши мумкин.

---

Услуб асоси. Пироузум кислота 2,4-динитрофенилгидразининг (2,4-ДНФГ)
кислотали эритмаси билан реакцияга киришиб, пироузум кислотанинг 2,4-
динитрофенилгидразонини щосил =илади. У бош=а гидразонлардан фар =
=илиб, толуолда яхши эрийди. Шу сабабли уни реакцион аралашмадан осон
экстракция =илиб олиш мумкин. Толуолли экстрактга иш=орнинг спиртдаги
эритмаси =ышилганда пироузум кислотанинг 2,4-динитрофенилгидразонига
щос =изил-сар\иш ранг пайдо былади. Рангнинг равшанлик даражаси
текширилаётган эритмадаги пироузум кислотанинг концентрациясига ты=ри
пропорционал.
Реактивлар. 1. Учхлорсирка кислотасининг 5%ли эритмаси;
2.
2,4-динитрофенилгидразининг 2м хлорид кислотаси эритмасидаги 0,1%ли
эритмаси;
3.
толуол;
4.
натрий карбонат, 10%ли эритмаси;
5.
натрий гидроксиднинг 1,5м эритмаси;
Жихозлар. Пробиркалар, 1 ва 5мл хажмдаги пипеткалар, 25мл хажмдаги
бюретка, центрифуга, ФЭК
Ишнинг бажарилиши. Анализ учун 1мл биологик сую=лик (=он, сийдик)
ёки 1г ты=има олинади . Агар текширишга ты=има олинса , 5%ли сову=
щолдаги Учхлорсирка кислотадан 1: 9 нисбатда =ышилади ва щовончада 10-
15 минут яхшилаб эзилади. Сынгра 10 минут 3000 марта айланиш тезлигида
центрифугаланади. Ты=иманинг о=силсиз =исмидан алощида пробиркага
1мл, контрол сифатида бош=а пробиркага 1мл дистилланган сув =уйилади.
Анализ =илинаётган щар бир намунадан 2-3та параллел намуна олиш
ма=
садга мувофи=
дир
. Тажриба ва контрол эритма учун олинган
пробиркалардаги сую=ликлар устига 0,5мл дан 2,4-динитрофенил эритмаси
=
уйиб , аралаштирилгач, 5минутдан сынг сув билан тыйинтирилган
толуолдан 2,5мл =ышилиб, 1-2 минут чай=атилади . Эритма =аватларга
ажралгач, тоза, =уру= пробиркага устки-толуолли =атламдан 1мл олиб, унинг
устига 2мл калий гидроксиднинг спиртдаги эритмасидан (2,5%ли) =ышилади
ва 15 минутдан кейин ФЭКнинг кык светофильтрида (465нм)
фотометрланади.