Фармамакологик биокимё

Машғулот 14.
Антигистамин дори моддаларининг (аллергияга қарши) таъсир
механизмини гистаминаза фаоллиги бўйича аниқлаш.
Аллергия жараёни намоён бўлишига қараб икки турда бўлади: тез ва суст
ҳосил бўладиган жавоб.
Тез хосил бўладиган аллергик жавобни гуморал иммунитет тизими амалга
оширади, В лимфоцитлар антителалар қарши таначалар синтезлайди ва
организм семиз хужайралари ва базофиллардан биологик фаол моддалар
брадикинин, гистамин, серотонин, простагландинлар ажралиб чиқиб,
томирлар 
ўтказувчанлигини 
кучайтиради 
ва 
бошқа 
тўқималарни
жароҳатлайди. Бунда қондаги В лимфоцитлар сони, гистамин, брадикинин,
серотонинлар миқдори қисқа вақт ичида ортади. Бундай холатларда
тезликда гистаминга қарши дорилар юборилади.
Суст кечадиган аллергик реакцияда Т лимфоцитлар сони ортиши
кузатилади. Бу 
холларда 
иммунитет 
тизимини 
сусайтирувчи
иммунодепрессантлар қўлланилади.
Услубнинг асоси:
Организмда антигистамин дорилар метаболизмини тўқималарда ва
биологик суюқликларда гистаминаза активлиги орқали ўрганиш мумкин.
Гистаминаза активлигини аниқлаш гистаминнинг ортафтал альдегиди
билан флуоресценцияланувчи бирикма ҳосил қилишига асосланган.
Текшириш материали:
интакт ва қорин орқали 1 мл гистаминни 1 % эритмаси юборилган
каламушлар
1. 1,34% ли натрий оксалатни сувдаги эритмаси

---

2. концентрланган 1 н ва 0.4 н НСl
3. бутанол - хлороформ аралашмаси З:2 нисбатда
4. Абсолют метил спирти
5. 5 н ли натрий хлор
6. кристалланган NаCl
7. 0,1 NаОН
8. 1 н ли NаОН
9. 1.4 М ортофтал кислотаси ва ортофтал альдегиди
10. гистаминнинг стандарт эритмаси
11. 0,2 М фосфат буфери рН 7.2
12. 10 % ли учхлор сирка кислотаси (ТХУК)
Амалий ишнинг бориши:
Колбага 2.9 мл фосфат буфери солиниб 0,5 мл қон зардоби кўшилади.
Контрол колбаларга 0,5 мл дистилланган сув ва гистамин эритмаси
солинади, кейин 37
0
С термостатга 1 соатга қолдирилади. Инкубациядан
кейин колбаларга 5 мл учхлор сирка кислотаси солиниб, центрифуга
пробиркаларига солинади ва 15 дақиқа 4000 мин. айланиш тезлигида
центрифугаланади. 4 мл чўкма усти суюқлигига 0.5 мл 5 н ли NаОН; 1,5 г
NаСl; 10 мл хлороформ - бутанол аралашмаси қўшилади. 3 дақиқа давомида
силкитилиб, 4000 айланиш тезлигида 5 дақиқа центрифугаланади. Сув
қисмини олиб ташлаб, 5 мл 0,1 н NаОН NаСl билан солинади. Пробиркалар
3 минут силкитилиб 5 минут 4000 айланиш тезлигида центрифугаланади.
Сув қисми олиниб унга 0,5 мл 1 н NаСl ва 0,12 мл ортофтал альдегиди
қўшилади. 4 дақиқадан кейин 0.2 мл Н
3
РО
4
солинади ва 365 нм узунликда
СФ да кўрилади.
Амалий ишнинг моҳияти:
Гистаминазанинг активлигини аниқлаш гистамин метаболизмини
ўрганишда,аллергияга қарши дорилар самарасини билишда, ахамиятга эга.

---