Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 38 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
laboratory. The ORS laboratory protocol is summarized below for 
convenience. 
Perform medical device extractions and final endotoxin concentration 
calculations per USP <161> and USP <1085> Guidelines on the Endotoxins 
Test. 
Alternatively, if deemed necessary, perform the ORS laboratory modified 
extraction and analysis of Endotoxin from Medical Devices: 
a. Preparation of 1% SLS solution 
Prepare a 1% stock solution by placing one (1) gram of sodium lauryl sulfate 
(SLS) into a depyrogenated glass flask and add 99 ml of pyrogen-free water. 
Allow the SLS to fully dissolve. This should be followed by filtration through a 
10,000 MW depyrogenation membrane filter into a pyrogen-free glass or 
plastic container. 
b. Equipment needed: Ultrasonic bath with a range of 150 to 480 
watts.
c. Extraction procedure 
i. Dilute 2mL of 1% SLS stock solution to 20mL (0.1%) using 
LAL reagent water in a 20 x 150 mm screw-cap tube. 
ii. Dilute 1.5mL of the 0.1% SLS solution to 15 mL (0.01%) using 
LAL reagent water in a 20 x 150 mm screw-cap tube. 
iii. Prepare the appropriate number of tubes (one tube for each 
device) and one as a negative / system control. Preheat in a 
water bath to 37°C ±1°C. 
iv. Aseptically remove the device from its packaging and cut it 
diagonally into pieces less than 5mm in length. Small metal 
and plastic pieces such as needles and luer-locks should be 
tested whole. Pyrogen-free fluid pathways should be flushed 
with extract solution. 
Note: Extract volume may need to be adjusted depending on 
medical device size.
v. Place all pieces into the 20 x 150 mm tube containing 15 mL 
of preheated (37°C ±1°C) 0.01% SLS rinse solution. 
vi. Vortex the tubes for 30 – 60 seconds or until all pieces of the 
device are immersed in the rinse solution. 
vii. Sonicate the test containers for 60 minutes (wattage range 
150 – 480 watts) at 37°C ±1°C. Do not sonicate more tubes 
than can be vortexed within 15 minutes of completion of the 
sonication. Make sure the water in the sonicator covers the 

---