Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 47 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
tubes, petri-plates and serological pipettes may be used so long as the use of 
this equipment does not affect the quantitative aspect of potency testing. 
Additional equipment includes a stainless steel penicylinders, penicylinder 
dropper, cuvettes, pipettor and micropipette, pH meter, hot plate, adjustable-
temperature water bath, incubator and a manual/automatic plate reader or UV-
VIS spectrophotometer.
Equipment in direct contact with the test microorganism should be clean (i.e. 
residue free) and sterile. Residues (e.g. antibiotic or detergent) may interfere 
with antibiotic potency testing. Methods of equipment cleaning and dry and 
heat sterilization should have appropriate validation and verification checks to 
ensure glassware is clean and sterile. See USP <81> for penicylinder cleaning 
instructions and USP <1051> Cleaning Glass Apparatus, for glassware 
cleaning instructions.
Equipment used to provide a unit of measurement should have the appropriate 
validation and frequent verification checks to ensure reliable and reproducible 
results; examples of such equipment include a weight scale, pH meter, 
autoclave, micrometer, manual/automatic plate reader and UV-VIS 
spectrophotometer. For more information on manual and automatic plate 
readers, see section titled Antibiotic Potency Testing: Plate Method.
Testing can be performed on a laboratory benchtop and does not require setup 
in a clean room or a laminar flow hood. However, it is important to exercise 
aseptic technique when working with general growth media and test organisms 
to prevent cross contamination.
When performing the plate method, it is important to use a laboratory bench 
top that has been checked with a level. The bench top will be used to prepare 
single and bi-layer agar plates. If the bench top is not level, liquid agar could 
potentially pool unevenly within a petri plate. Unevenly distributed agar causes 
uneven antibiotic diffusion. Zones of inhibition formed after diffusion should be 
uniform in shape (i.e. circular). Irregular shaped ZOIs do not have a diameter 
that can be measured accurately. Irregular shapes include ovoid, elliptical 
and/or any shape without a uniform and defined perimeter.
C. Test Organism, Inoculum Preparation and Standardization 
Antibiotic potency is dependent upon antibiotic-microorganism specificity. USP 
<81> identifies specific microorganisms and correlating antibiotics for testing. 
Prior to use in test, the test microorganism must be characterized as pure and 
robust. Primary and working cultures must be aseptically prepared and 
dedicated to preventing contamination of the primary test microorganism. If the 
primary and/or working culture becomes contaminated, perform a visual 
inspection and basic microscopy for typical growth characteristics and 
morphology. Additionally, AOAC approved rapid identity testing methods such 

---