Ферментативные методы анализа, основаны на использовании хим р-ций с участием ферментов

Разновидности Ф. м. а. Среди наиб. чувствительных Ф. м. а. особое место занимают би о люминесцентные методы (см. Люминесцентный анализ}. Чаще других используют процессы, катализируемые ферментом люциферазой светляков. Система включает люциферин (ф-ла 1, люциферин светляка), к-рый в присут. АТФ подвергается катализируемому люциферазой окислению кислородом с образованием люминесцирующего в-ва. Высокий квантовый выход биолюминесценции, применение полиферментных сопряженных р-ций позволяет определять нек-рые соед. при концентрации 0,001-0,1 пМ.

Один из важных Ф.м. а.- анализ с использованием ферментных электродов, к-рые сочетают высокую селективность биокатализа и совершенную технику электрохим. методов. В простейшем варианте расгворимый фермент помещают между двумя полупроницаемыми мембранами; одна отделяет р-р фермента от электродного датчика, другая - от анализируемого р-ра. Однако чаще ферменты иммобилизуют, включая их в полимерные или гелевые пленки альбумина, желатины, агар-агара, коллагена, гидроксида Al или ковалентно присоединяя к пов-сти стеклянных дисков, полупроницаемых мембран (целлюлозных, поликарбонатных). Пленки прикрепляют к пов-сти электрода. Часто такую пленку (мембрану) готовят непосредственно на пов-сти электрода. Субстрат диффундирует через слой, содержащий фермент, образуя электроактивное в-во, детектируемое при помощи потен-циометрич. или амперометрич. датчика.
Преимущества потенциометрич. детектирования - легкость изготовления ферментного электрода и более низкая его стоимость. Однако время отклика таких электродов весьма значительно. В качестве электрохим. датчиков при создании ферментных электродов этого типа часто используют стеклянный рН-электрод, NH⁺₄-специфичный электрод, газовые электроды для CO₂ и NH₃. Потенциометрич. ферментные электроды были предложены для определения аминокислот, мочевины, глюкозы, пенициллина, нитрит- и нитрат-ионов; применяемые ферменты - оксидазы и декарбоксилазы аминокислот, уреаза, глюкозооксидаза, нитрит- и нитратредукта-зы и др.
Амперометрич. ферментные электроды обычно применяют в случае ферментативных р-ций, протекающих с выделением или потреблением O₂ или H₂O₂. Используют при этом O₂- или H₂O₂-чувствительные электроды. Амперометрич. детекторы отличаются от потенциометрических более широким диапазоном линейности. В амперометрич. ферментных датчиках применяют чаще всего ФАД(флавинадениндинуклеотид)-за-висимые оксидазы для определения глюкозы, холестерина, аминокислот.
В ферментных электродах м. б. использованы не только одноферментные и полиферментные системы, но и клетки микроорганизмов ("бактериальные" электроды). Созданы ферментные электроды с ферментным реактором. В таком электроде иммобилизованный (напр., на стеклянных шариках) фермент помещен в небольшой реактор, через к-рый пропускают анализируемую пробу. Продукты р-ции - электроактивные в-ва, их детектируют с помощью проточных измерительных электродов. Ферментные электроды такого типа применяют для определения мочевины и аминокислот.
Ферментные электроды представляют собой биосенсоры (см.