Ферментативные методы анализа, основаны на использовании хим р-ций с участием ферментов
Download 30.15 Kb.
|
ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА
- Bu sahifa navigatsiya:
- Автоматизированный анализ
Сенсоры химические), к-рые позволяют быстро и селективно проводить определение целого ряда компонентов в сложных по составу объектах.
На основе использования ферментов созданы разл. экспресс-тесты. Многие из них чрезвычайно просты. Напр., тест-устройство для определения токсичных фосфорсодержащих пестицидов в продуктах питания представляет собой бумажную полоску, один конец к-рой пропитан р-ром хро-могенного субстрата, а второй содержит иммобилизованную холинэстеразу. При анализе концы полоски совмещают и обмакивают в воду, выжатый из фруктов или овощей сок и т. д. Появление окраски бумажки свидетельствует об отсутствии пестицидов в пробе. T. к. пестициды в больших, чем ПДК, кол-вах ингибируют холинэстеразу, то отсутствие окраски свидетельствует о превышении ПДК пестицидов. Аналогичные бумажные тесты предложены для определения глюкозы в моче и крови, ртути в воде и т. д. Широкое распространение получают иммунофер-ментные методы- разновидность иммунных методов анализа (радиоактивная или флуоресцентная метка заменяется ферментом). Их используют для определения иммуногло-булинов, гормонов, стероидов, лек. ср-в, пестицидов и др. Эти методы обладают исключительно высокой чувствительностью и селективностью. Для повышения воспроизводимости, экспрессности и производительности в Ф. м. а. применяют автоматич. анализаторы разного типа (см. Автоматизированный анализ). Катали-тич. р-ции с участием растворимых и иммобилизованных ферментов, а также ферментных реакторов все чаще используют в проточно-инжекционном анализе. Ф. м. а. применяют в хим. анализе, по сравнению с др. методами, недостаточно. Из более чем 1800 полученных ферментов используют ок. 50; наиб. часто - глюкозооксида-зу, уреазу, уриказу, люциферазу, пероксидазу, алкогольдегид-рогеназу, холинэстеразу, лактатдегидрогеназу, разл. аминоок-сидазы. Ф. м. а. позволяют определять селективно, а в отдельных случаях специфично такие биологически активные субстраты, как глюкоза, мочевина и мочевая к-та, разл. аминокислоты, липиды, холестерин, антибиотики, этанол, H2O2, NO-2 и NO-3 и мн. другие. Разработаны чрезвычайно чувствительные методы определения мн. ферментов (перок-сидазы в крови, креатинфосфокиназы в крови при диагностике инсульта и инфаркта миокарда и др.) и коферментов (НАД, флавинмононуклеотид, АТФ и т.д.). Предложены методики чувствительного определения большого числа эффекторов ферментов (фосфорсодержащие пестициды, ионы Hg, Cu, Zn и др.). Чрезвычайно чувствительны и селективны методы определения нек-рых ионов металлов (Zn, Cu) и анионов (CN-) на основе реактивации апоферментов. Цинк, напр., определяют практически специфически и в пикограммовых кол-вах по реактивации иммобилизованной пируватоксидазы, дезактивированной рядом комплексонов. Осн. области применения Ф. м. а.- клинич. медицина и биохимия. С помощью ферментов в крови, моче, тканях и др. биол. объектах определяют малые кол-ва физиологически активных в-в, метаболитов, ферментов, мутагенов, канцерогенов, лек. препаратов. Высокочувствительный и специфический биолюминесцентный метод определения АТФ позволяет разрабатывать методики измерения кол-ва клеток микроорганизмов, обнаружения микробных заражений, определения антибиотиков в биол. тканях и жидкостях по степени инги-бирования микробных клеток. Поскольку содержание АТФ пропорционально кол-ву клеток или биомассы, то эти методики чрезвычайно чувствительны и предел обнаружения может достигать 100 клеток. Ферментативные методы используют также в пищ. и фармакологич. пром-сти, при контроле загрязнений окружающей среды. Так, напр., разработаны и применяются ферментативные методы определения фосфорсодержащих пестицидов, фенолов, аминов, ионов тяжелых металлов в природных и сточных водах. Лит.: Долманова И. Ф., Угарова Н.Н., "Ж. аналит. химии", 1980, т. 35, в. 8, с. 1597-1639; Кулис Ю.Ю., Аналитические системы на основе иммобилизованных ферментов, Вильнюс, 1981; Угарова H. H., Б о в -ко Л. Ю., Биолюминесценция и биолюминесцентный анализ, M., 1981; Bioana-lytical applications of enzymes, ed. by C. Suelter, в сб.: Methods of biochemical analyses, N. Y., 1992. И. Ф. Долманова. Download 30.15 Kb. Do'stlaringiz bilan baham: |
Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling
ma'muriyatiga murojaat qiling