Fermentlarni immobillash va barqarorlash texnologiyasi. Reja

R - COOH + H₂N - F ^pH=7~⁹'^{5; 0} °^C, R - С - NH - F + H,Q
ii
O'n daqiqa О
О
H₃C-C-C1-N₂N-F P¹^⁷'^⁴"⁰, H3C-C-NII F + IICI
bir necha daqiqa ⁰

Oqsildagi elektrostatik o'zaro ta'sir balansida, pH ning o'z-garishida hamda immobillangan preparatning kimyoviy jihatdan barqarorligida quyidagi holatni hisobga olish zarur, ya'ni kislotali sharoitda karboksil guruhi katalizatorlik vazifasini bajarib preparat-dagi amid bog'ning gidrolizini tezlashtiradi. Atsillovchi agentlar sifatida faollangan efirlar (karbon kislotalarning boshqa hosilalari, masalan, n-nitrofenil efirlari) qatnashishi mumkin.

Reaksiyaning shunisi ajoyibki. oqsilning modifikatsiyasi jara­yonida spektrofotometrik usul bilan reaksiya borishini nazorat qilish uchun qulay xromofor belgi - nitrofcnolyat ionlar (pH=7) ajralib chiqadi.
Faollangan karbon kislotaning hosilalarini reaksiyaga kirishish xususiyati tizimdan chiqib ketuvchi xlorangidriddan cfirgacha bo'lgan guruhining kislotaliligi kamaygan sari pasayib boradi.

4.5. Immobillangan fermentlarning katalitik xususiyatlari

Odatda. fermentativ reaksiya tezligi (V) Mixaelis-Menten leng-lamasi doirasida ifodalanadi: '

_v_ K_kat(E)₀(S) K_M,exl ⁺(S)o'

(Eo) va (S₀) - tizimdagi ferment va substrat konsentratsiyalari; K_kat - fermentativ reaksiya katalitik doimiyligi; K_M?ext - Mixaelis doimiyligi (ehtimolligi).

Mixaelis doimiyligi fermentni substrat bilan to'yingan hol-dagi substrat konsentratsiyasini ifodalaydi. Immobillangan fer­mentlar uchun ferment yaqinidagi (lokal) substrat konsentra-tsiyasi tizimning butun hajmidagi konsentratsiyasidan farq qilishi mumkin. Bunday holatda, tajribada kuzatiladigan K_M,_ext substrat konsentratsiyasiga bog'liq bo'lishi kerak. K_kat hosil bo'lgan fer-ment-substrat kompleksining reaksion xususiyatini xarakterlaydi. Shunung uchun, K_kat tizimda fermentning konformatsiyasi bilan aniqlanadi.
Shunday qilib, immobillangan fermentlar ishtirokida kataliz-da kuzatiladigan barcha kinetik effektlarni ikki guruhiga bo'lish mumkin. Birinchi guruhida ferment holati (konformatsiyasi)ga immobillashning ta'siri bilan bog'liq effektlar, ikkinchi guruh-da esa tizimda reagentlarning tarqalishi bilan bog'liq effektlar kiradi.