Х. О. Турсунов1,2, Г. Э. Болтабаева1, Б. Б. Воҳидов

А. Б.
C. Д.

SF-1
SF-2
SF-3
SF-7
E

SF-4
SF-6
Ф

SF-5
SF-8
Г .
1-расм. Сохта каштаннинг тозаланган уруғларидан сапонинларни ажратиш ва аниқлаш. (А) Сохта каштан дарахти ва унинг кесилган уруғи. (Б), (С) эсцин стандарти ва сохта каштан уруғлари экстрактининг ДМД хроматограммалари. (Д) сохта каштаннинг тозаланган уруғи экстрактининг ДМД хроматограммаси. (Е) SF-1, SF-2, SF-3 ва SF-7 ларининг хроматомасс спектр маълумотлари; Е1 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1129; Е2 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1099; Е3 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1131; Е4 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1113. (Ф) SF-4 ва SF-6 ларининг хроматомасс спектр маълумотлари; Ф1 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1089; Ф2 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1117. (Г) ларининг хромато-масс-спектр маълумотлари; Г1 кучайтирилган масса спектри м/з [М-H]^– 1057; Г2 қўзғалган масса спектри м/з [М-H]^–1089. Барча хроматограммалар 226 нм да умумий диодматрицали детекторларда аниқланган (ДМД) билан манфий электроспрей ионлари режимида моноквадратпол Shimadzu 2020 тизими билан жиҳозланган Shimadzu суюқлик хроматографиясида олинган.

2- расм.Эсцин сапонинларининг структура формулалари

2-жадвал
Сохта каштан уруғидан ажратилган эсцин сапонинларининг аниқланган фракциялари.

Фракция Ушланиш вақти, дақ Номи R1 R2 R3 R4 R5 R6 м/з; [M-H]^- SF-1 11.941 Эсцин Iа H Tig Ac OH H Glc-p 1129 Эсцин Ib, H Ang Ac OH H Glc-p Изоэсцин Iа, H H Tig OH Ac Glc-p Изоэсцин Ib H H Ang OH Ac Glc-p Эсцин IVc Ang Ac H OH H Glc-p Эсцин IVd H Tig H OH Ac Glc-p Эсцин VIb H Ang H OH Ac Glc-p Изоэсцин VIIa H Tig H OH Ac Gal-p SF-2 10.791 Эсцин IIа H Tig Ac OH H Xyl-p 1099 Эсцин IIb H Ang Ac OH H Xyl-p Изоэсцин IIа H Tig H OH Ac Xyl-p Изоэсцин IIb H Ang H OH Ac Xyl-p SF-3 11.343 Эсцин IIIа H Tig Ac H H Gal-p 1113 Эсцин IIIb H Ang Ac H H Gal-p Изоэсцин IIIа H Tig H H Ac Gal-p Изоэсцин IIIb H Ang H H Ac Gal-p Изоэсцин VIIIа H Ang H H Ac Glc-p SF-4 10.782 Эсцин IVа H Ac Ac OH H Glc-p 1089 SF-5 13.210 Эсцин IVе H H H OH Tig Glc-p 1087 Эсцин IVf H H H OH Ang Glc-p Эсцин IVg H H Tig OH H Glc-p Эсцин IVh H H Ang OH H Glc-p Деацетилэсцин Iа H Tig H OH H Glc-p Деацетилэсцин Ib H Ang H OH H Glc-p SF-6 10.343 Эсцин V H MP Ac OH H Glc-p 1117 ИзоэсцинV H MP H OH Ac Glc-p SF-7 10.938 Эсцин VI H MB Ac OH H Glc-p 1131 Изоэсцин VIа H MB H OH Ac Glc-p SF-8 12.587 Деацетилэсцин IIa H Tig H OH H Xyl-p 1057 Деацетилэсцин IIa H Ang H OH H Xyl-p 3-расм.Эсцин сапонинларидаги фракцион таркибнинг миқдори

Ўзбекистонда етиштирилган сохта каштан уруғларидан ажратиб олинган эсцин субстанцияси миқдорий таҳлили амалга оширилди. Олинган натижалар унинг таркибида (95±3,6) % эсцин ва унинг ҳосилалари борлигини кўрсатди. Эсцин субстанциясини унинг таркибидаги моддалар молекуляр массасига қараб фракцияларга ажратиш орқали миқдори кўп бўлган изомер ҳосилалари аниқланди. Жумладан, эсцин субстанцияси таркибидаги фракцияларнинг миқдорлари нисбати SF-1: SF-2: SF-3: SF-4: SF-5: SF-6: SF-7: SF-8 мос равишда 5,51: 5,04: 1,40: 3,13: 1,38: 1,04: 2,72: 1 бўлиши тадқиқотлар орқали исботланди. Эсцин субстанциясининг асосий қисмини SF-1, SF-2, SF-4 ва SF-7 ташкил этиши кўрсатилди. Бу эса ўз навбатида унинг биологик фаоллиги ҳам таркибидаги фракциялар билан боғлиқ дейиш мумкин.. Бунинг учун эсциннинг ҳар бир фракциялари биологик фаоллигини алоҳида-алоҳида тадқиқ этилиши, сўнгра якуний хулоса қилиш мумкин бўлади.
Хулоса. Ўзбекистонда етиштирилган сохта каштан уруғидан биринчи марта эсцин экстракти ажратилди. Уруғлардаги эсцинлар миқдори (4,2±1,3) % эканлиги аниқланди. Экстрактни қайта ишлаш асосида эсцин миқдори (95±3,6) % дан юқори бўлган субстанция олиш усули ишлаб чиқилди. Тозаланган эсцин моддаси сапонинларнинг молекуляр массасига кўра 8 та фракцияга ажратилиб уларнинг ўзаро нисбатлари тадқиқ этилди. Эсцин субстанциясининг асосий қисмини SF-1, SF-2, SF-4 ва SF-7 фракциялари ташкил этиши исботланди.
Адабиётлар

1. 
   Komes, D., et al., Phenolic composition and antioxidant properties of some traditionally used medicinal plants affected by the extraction time and hydrolysis. Phytochemical analysis, 2011. 22(2): p. 172-180.
   
2. 
   Butler, M.S., A.A. Robertson, and M.A. Cooper, Natural product and natural product derived drugs in clinical trials. Natural product reports, 2014. 31(11): p. 1612-1661.
   
3. 
   Zhang, Z., S. Li, and X.-Y. Lian, An overview of genus Aesculus L.: ethnobotany, phytochemistry, and pharmacological activities. Pharmaceutical Crops, 2010. 1(1).
   
4. 
   Kim, J.W., et al., Antiviral escin derivatives from the seeds of Aesculus turbinata Blume (Japanese horse chestnut). Bioorganic & medicinal chemistry letters, 2017. 27(13): p. 3019-3025.
   
5. 
   Fang, L., G. Karakiulakis, and M. Roth, Are patients with hypertension and diabetes mellitus at increased risk for COVID-19 infection? The Lancet. Respiratory medicine, 2020. 8(4): p. e21-e21.
   
6. 
   Pittler, M.H. and E. Ernst, Horse chestnut seed extract for chronic venous insufficiency. Cochrane database of systematic reviews, 2012(11).
   
7. 
   Wilkinson, J. and A. Brown, Horse Chestnut–Aesculus Hippocastanum: Potential Applications in Cosmetic Skin‐care Products. International journal of cosmetic science, 1999. 21(6): p. 437-447.
   
8. 
   Wu, C.-Y., et al., Small molecules targeting severe acute respiratory syndrome human coronavirus. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2004. 101(27): p. 10012-10017.
   
9. 
   Rao, A. and M.-K. Sung, Saponins as anticarcinogens. The Journal of nutrition, 1995. 125(suppl_3): p. 717S-724S.
   
10. 
    Cheong, D.H., et al., Molecular targets and anti-cancer potential of escin. Cancer letters, 2018. 422: p. 1-8.
    
11. 
    Varinská, L., et al., β-Escin effectively modulates HUVECs proliferation and tube formation. Molecules, 2018. 23(1): p. 197.
    
12. 
    Liang, J., et al., In vivo cardiotoxicity induced by sodium aescinate in zebrafish larvae. Molecules, 2016. 21(3): p. 190.
    
13. 
    Li, B., et al., TIGAR knockdown enhanced the anticancer effect of aescin via regulating autophagy and apoptosis in colorectal cancer cells. Acta pharmacologica Sinica, 2019. 40(1): p. 111-121.
    
14. 
    Wang, Y., et al., Escin Ia suppresses the metastasis of triple-negative breast cancer by inhibiting epithelial-mesenchymal transition via down-regulating LOXL2 expression. Oncotarget, 2016. 7(17): p. 23684.
    
15. 
    Patlolla, J.M. and C.V. Rao, Anti-inflammatory and Anti-cancer Properties of β-Escin, a Triterpene Saponin. Current Pharmacology Reports, 2015. 1(3): p. 170-178.
    
16. 
    Gallelli, L., Escin: A review of its anti-edematous, anti-inflammatory, and venotonic properties. Drug design, development and therapy, 2019. 13: p. 3425.
    
17. 
    YOSHIKAWA, M., et al., Escins-Ia, Ib, IIa, IIb, and IIIa, bioactive triterpene oligoglycosides from the seeds of Aesculus hippocastanum L.: their inhibitory effects on ethanol absorption and hypoglycemic activity on glucose tolerance test. Chemical and pharmaceutical bulletin, 1994. 42(6): p. 1357-1359.
    
18. 
    Yoshikawa, M., et al., Bioactive saponins and glycosides. XII. Horse chestnut.(2): Structures of escins IIIb, IV, V, and VI and isoescins Ia, Ib, and V, acylated polyhydroxyoleanene triterpene oligoglycosides, from the seeds of horse chestnut tree (Aesculus hippocastanum L., Hippocastanaceae). Chemical and pharmaceutical bulletin, 1998. 46(11): p. 1764-1769.
    
19. 
    Wu, X.-J., et al., Comparative pharmacokinetics and the bioavailability of escin Ib and isoescin Ib following the administration of escin, pure escin Ib and isoescin Ib in rats. Journal of ethnopharmacology, 2014. 151(2): p. 839-845.
    
20. 
    Sreij, R., et al., Aescin-cholesterol complexes in DMPC model membranes: a DSC and temperature-dependent scattering study. Scientific reports, 2019. 9(1): p. 1-15.
    
21. 
    Shibuya, M., et al., Origin of structural diversity in natural triterpenes: direct synthesis of seco-triterpene skeletons by oxidosqualene cyclase. Journal of the American Chemical Society, 2007. 129(5): p. 1450-1455.
    
22. 
    Oszmiański, J., S. Kalisz, and W. Aneta, The content of phenolic compounds in leaf tissues of white (Aesculus hippocastanum L.) and red horse chestnut (Aesculus carea H.) colonized by the horse chestnut leaf miner (Cameraria ohridella Deschka & Dimić). Molecules, 2014. 19(9): p. 14625-14636.
    
23. 
    Matsuda, H., et al., Antiinflammatory effects of escins Ia, Ib, IIa, and IIb from horse chestnut, the seeds of Aesculus hippocastanum L. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1997. 7(13): p. 1611-1616.
    
24. 
    Sreij, R., et al., Interaction of the saponin aescin with ibuprofen in DMPC model membranes. Molecular pharmaceutics, 2018. 15(10): p. 4446-4461.
    
25. 
    Sirtori, C.R., Aescin: pharmacology, pharmacokinetics and therapeutic profile. Pharmacological Research, 2001. 44(3): p. 183-193.
    
26. 
    Hu, J.-N., et al., Anti-obesity Effects of Escins Extracted from the Seeds of Aesculus turbinata B LUME (Hippocastanaceae). Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 2008. 56(1): p. 12-16.
    
27. 
    Sarikurkcu, C., et al., Enzyme and Biological Activities of the Water Extracts from the Plants Aesculus hippocastanum, Olea europaea and Hypericum perforatum That Are Used as Folk Remedies in Turkey. Molecules, 2020. 25(5): p. 1202.
    
28. 
    Matsuda, H., et al., Effects of escins Ia, Ib, IIa, and IIb from horse chestnut, the seeds of Aesculus hippocastanum L., on acute inflammation in animals. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 1997. 20(10): p. 1092-1095.
    
29. 
    Michelini, F.M., L.E. Alché, and C.A. Bueno, Virucidal, antiviral and immunomodulatory activities of β‐escin and Aesculus hippocastanum extract. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2018. 70(11): p. 1561-1571.
    
30. 
    Raetz, J., M. Wilson, and K. Collins, Varicose veins: Diagnosis and treatment. American family physician, 2019. 99(11): p. 682-688.
    
31. 
    Xiang, Q.Y., et al., Origin and biogeography of Aesculus L.(Hippocastanaceae): a molecular phylogenetic perspective. Evolution, 1998. 52(4): p. 988-997.
    
32. 
    Kimura, H., et al., Identification of novel saponins from edible seeds of Japanese horse chestnut (Aesculus turbinata Blume) after treatment with wooden ashes and their nutraceutical activity. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 2006. 41(5): p. 1657-1665.
    
33. 
    Chen, J., et al., Determination of four major saponins in the seeds of Aesculus chinensis Bunge using accelerated solvent extraction followed by high-performance liquid chromatography and electrospray-time of flight mass spectrometry. Analytica chimica acta, 2007. 596(2): p. 273-280.
    
34. 
    Avci, G., et al., Effects of escin mixture from the seeds of Aesculus hippocastanum on obesity in mice fed a high fat diet. Pharmaceutical biology, 2010. 48(3): p. 247-252.
    
35. 
    Amdekar, S., et al., Anti-inflammatory activity of lactobacillus on carrageenan-induced paw edema in male wistar rats. International journal of inflammation, 2012. 2012.
    

Х.О. Турсунов^1,2, Г.Э. Болтабаева¹, Б.Б. Воҳидов², З.Н. Каримова²,
А.Т. Шарипов²
ПОЛУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУБСТАНЦИИ ЭСЦИН ИЗ МЕСТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
В составе семян каштана ложного содержатся различные химические соедининения, такие как фенолы, флаваноиды, кумарины и тритерпеновые сапонины. Среди вышеуказанных соединений основную биологическую активность проявляют тритерпеновые сапонины. В настоящей работе нами был изучен химический состав Аеsculus hippocfstanum L., вырашенного в Узбекистане, который ранее не был изучен полностью. Изомерические сапонины каштана ложного экстрагировали водой при слабощелочной среде рН, осаждали подкислением и очищали методом гидрофобной хроматографии в короткой колонке С18. С помощью высокоэффективного жидкостного хроматомасс спектрометра (ВЭЖХ-МС), оснащенного одноквадрупольным масс-спектрометром определена, что фракция состоит из (95±3,6) % эсцина и остутствие смеси флаваноидов. Разделением веществ, содержащихся в субстанции эсцина на фракции по молекуляроной массе, определены наибольшие изомерные производные. В частности, исследованиями доказано, что соотношение количества фракций, содержашихся в составе субстанции эсцина SF-1: SF-2: SF-3: SF-4: SF-5: SF-6: SF-7: SF-8 составляет 5,51: 5,04: 1,40: 3,13: 1,38: 1,04: 2,72: 1, соответственно. Показано, что основную часть субстанции эсцина состваляет SF-1, SF-2, SF-4 и SF-7. Рекомендовано использование указанных четерех фракций при стандартизации эсцина.
Х.О. Tursunov, G.E. Boltabaeva, B.B. Vohidov, Z.N. Karimova,
А.Т. Sharipov
OBTAINING AND STANDARDIZATION OF ESCIN SUBSTANCE ON THE BASIS OF LOCAL MEDICINAL HERBAL RAW MATERIALS
Artificial chestnut seeds contain various chemical compounds such as phenols, flavonoids, coumarins, and triterpene saponins. Among the compounds mentioned above, the main biological activity is provided by triterpene saponins. In the current research, the chemical components of Аеsculus hippocfstanumL. grown in Uzbekistan that have not yet been studied in detail have been investigated. Isomeric saponins of artificial chestnut seeds were extracted with water in a slightly alkaline medium with pH, precipitated by acidification of the extract, and purified by hydrophobic chromatography in a small C18 column. Using high performance liquid chromatography - mass spectrometry (HPLC-MS) equipped with a single quadrupole mass spectrometer, it was determined that the fraction consisted of at least 95 ± 3.6% escin and was free of flavonoid compounds. By dividing the Escin substance into fractions according to the molecular weight of the substances in it, a large number of isomeric derivatives were identified. In particular, the ratio of the fractions in the escin substance is SF-1: SF-2: SF-3: SF-4: SF-5: SF-6: SF-7: SF-8, respectively 5.51: 5.04: 1, 40: 3.13: 1.38: 1.04: 2.72: 1. It has been identified that the main part of Escin's substance is SF-1, SF-2, SF-4 and SF-7. It has been recommended to use these 4 fractions when standardizing Escin.