Искусственное осеменение

Замораживание спермы жеребца

Для замораживания пригодна сперма с подвижностью сперми- ев не ниже 5 баллов и концентрацией не менее 150 млн спермиев в 1 мл.

Полученный и профильтрованный (через 4 слоя марли) эякулят после оценки разбавляют в 4–5 раз одной из следующих сред: лак- то-хелато-цитратно-желточной (ЛХЦЖ) или лактозо-желточно- сульфатной (ЛЖС).
Состав ЛХЦЖ: лактоза (11 г); желток (1,6 г); 4,2%-й раствор двууглекислой соды (0,2 мл); 35,7%-й раствор цитрата натрия (0,25 мг); хелатон (100 мг); глицерин (3,5 мл); вода дистиллирован- ная (100 мл).
Состав ЛЖС: лактоза (10 г); сульфат аммиака (150 мг); желток (1,6 г); глицерин (3,5 мл); вода дистиллированная (100 мл).
Разбавленную сперму охлаждают в холодильнике до близкой к 0° температуры (+2°…+4° С) и выдерживают 2 ч. После чего замо- раживают на поверхности сухого льда в виде гранул или в алюми- ниевых пакетах в холодном газе над поверхностью жидкого азота.
При замораживании в виде гранул сперму наносят по 0,2 мл в лунки на поверхности сухого льда. Через 5 мин замороженные гра- нулы собирают и упаковывают в алюминиевые тубы по 125– 130 шт. (это составляет разовую дозу в 25 мл). Тубы с гранулами помещают на хранение в жидкий азот.
При замораживании дозы в парах жидкого азота, еѐ предвари- тельно разливают по 25 мл в охлажденные алюминиевые пакеты. Заморозку проводят в сосудах Дьюара или стационарных храни- лищах с помощью специальных устройств, которые позволяют ав- томатически держать сперму на заданном расстоянии над жидким азотом. Устройство состоит из пенопластового поплавка, съемного держателя (металлического сита) для емкостей со спермой и ме-
таллического кольца-испарителя для увеличения интенсивности испарения азота.
Пакеты со спермой помещают в держатели, которые вместе с поплавком переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в жидкий азот и закрывают контейнер крышкой (рассто- яние от пакета до жидкого азота – 20 мм). Через 5 мин пакеты с за- мороженной спермой переносят в хранилище с жидким азотом.
Для оттаивания гранулированной дозы тубы вынимают из жидкого азота, вскрывают, а гранулы быстро пересыпают ровным слоем в коническую колбу. Колбу погружают в водяную баню при температуре +38°…+40 °С, слегка взбалтывая круговыми движе- ниями в течение 1 – 2 мин до полного исчезновения гранул.
Для оттаивания спермы, замороженной в алюминиевых паке- тах, их быстро переносят пинцетом из жидкого азота на 1–2 мин в водяную баню при температуре 40 °С. Пакет, вынутый из воды, протирают стерильной марлей, затем спиртовым тампоном, обре- зают стерильными ножницами край пакета и после проверки каче- ства сперму используют для осеменения кобыл. Подвижность в от- таявшей сперме должна быть не ниже 2 баллов. Доза для осемене- ния (25 мл) содержит не менее 3 млрд подвижных спермиев.

0.