Keyingi yillarda kimyo texnologiyada organik moddalarni

Kantik PCR (Kantik PCR, Q-PCR (inglizcha)) yoki Haqiqiy vaqtli PCR - har bir reaksiya siklida muayyan PCR mahsulotining miqdorini o'lchashni bevosita kuzatish uchun foydalaniladi. Bu usul reaktsiya mahsuloti yig'ilayotganda aniq miqdorni o'lchash uchun flüoresan-etiketli primerlar yoki DNK problarini qo'llaydi yoki floresan interkalatsiyali bo'yoq ishlatiladi. Sybr yashil i (lekin undan yaxshiroq foydalanish kerak SYTO 13), ikki qavatli DNKga bog'langan. Sybr yashil i maxsus lyuminestsent problar yoki primerlarsiz real vaqtda PCR davomida PCR mahsulotlarini aniqlash va aniqlash uchun oddiy va iqtisodiy variantni taqdim etadi. Amplifikatsiya bo'yoq paytida SYBR Green I u PCR mahsulotlarining DNK kichik trubasiga kiritiladi va ko'k lazer bilan nurlanadigan bo'lsa, bog'lanmagan bo'yoqlardan ko'ra kuchliroq flüoresan signalni chiqaradi. SYBR Green I совместим со всеми известными на сегодняшний день приборами для проведения ПЦР в режиме реального времени. Максимум поглощения для SYBR Green I находится при длине волны 494 нм. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения — при 290 нм и 380 нм. Максимум испускания для SYBR Green I находится при длине волны 521 нм (зелёный) [21] .

Ступенчатая ПЦР (Touchdown PCR (англ.) ) — с помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров. Birinchi tsikllar tegmaslik tavlanadigan harorat ustidagi haroratda amalga oshiriladi, keyin har bir necha davrda tavlanadigan harorat asta-sekin optimal darajaga tushadi. Bu primer butun uzunligi davomida qo'shimcha zanjir bilan hibridize qilinishini ta'minlash uchun amalga oshiriladi, eng maqbul tavlama haroratida, primer qisman qo'shimcha zanjir bilan hibridize qiladi. Primerning genomik DNK ga qisman hibridizatsiyasi, agar primer uchun birlashtiradigan joylar mavjud bo'lsa, nonspesifik amplifikatsiyaga olib keladi. Ko'pgina hollarda PCR ning dastlabki o'n tsikli 72-75 ° C gacha bo'lgan yopishqoqlik temperaturasida amalga oshiriladi va keyin darhol optimalgacha, masalan, 60-65 ° C gacha kamayishi mumkin.