Antikorlar en sık fluoresin isotiyosiyanat (FITC) ile işaretlenir. BUNA GÖRE; - Direk fluoresan antikor (DFA)
- Katı fazda klinik örnek (Ag)
- Üzerine FITC’li Ab
- Pozitif sonuç (fluoresan-yeşil görüntü)
- Bakteri ve viruslerin hızlı tanıda
- ♣ Kuduzda negri cisimciği
- ♣ Kolera tanısında
- İndirek fluoresan antikor (İFA)
- Katı fazda hazır Ag
- Hasta serumu(aranan Ab)
- FITC’li Anti-Ig
- Pozitif sonuç (fluoresan görüntü)
- Birçok bakteri virus enf ve otoimmun hast.
- ♣ FTA- Abs (T.pallidum)
- ♣ ANA, AMA vb
IF yöntemiyle klinik örneklerden hem Ag hem Ab aranır Fluoresan mikroskobu olması ve uzman kişi gereklidir
Yöntem aynı IF ve EIA gibidir - Radyoaktif madde
- I. 125 ve I. 132 kullanılır
Gamma sayaçlarında değerlendirilir Radyoaktif madde kullanımından dolayı sınırlıdır - Özellikle hormon testlerinde (TSH, T3, T4) kullanılır
- Radyo allergo sorbent (RAST) deneyi
- Allerjene spesifik IgE tayininde kullanılır
- Radioimmunosorbent (RIST)
- Serumda total IgE tayininde
- Antikoru ENZİMLE İŞARETLEME yöntemidir
- Peroksidaz, alkalin fosfataz ve beta galaktozidaz gibi enzimler
- Spesifik substratları renkli ürünlere çevirirler
- Peroksidaz/Orthofenilendiamin
- Alkali fosfataz/Nitrofenil fosfat
- Renkli ürünler spektrofotometrede belirli dalga boylarında olurlar
- Yöntemin;
- Kullanılan reaktifler uzun ömürlü olması
- Artık maddelerle ilgili radyasyon sorunu olmaması
- Uygulamasının basit ve otomatize edilebilmesi yönleriyle
- Aynı prensipli (işaretleme) RIA ve IF’ye göre avantajlıdır
- Dezavantajları ise;
- Antijen saptamada klinik örneğin uygunluğunun değerlendirememesi
- Bazı viral enfeksiyonlarda düşük Ag yoğunluğu saptanmaması
- IgM saptanmasında RF-IgM ile çatışmanın olması
- Bunun için Absorblama işlemi olması
Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması - Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması
- UYGULAMA PRENSİPLERİ
- Ag ve Ab (sınıfa özgül) saptayabilir
- Katı faz olarak;
- Plastik tabanlı mikrotitrasyon plakları
- Boncuk veya filtre kullanılır
Ag kaplı kuyucuk Ag kaplı kuyucuk Hasta serumu (Aranan Ab) Yıkama Enzim işaretli ikincil Ab Yıkama Substrat H2SO4 (Reaksiyonu durdurur) Spektrofotometre
Katı yüzeyde capture monoklonal yada poliklonal Ag içeren hasta serum örneği Yıkama Enzimle işaretli saptayıcı monoklonal yada poliklonal Yıkama Substrat H2SO4 (Reaksiyonu durdurma) Spektrofotometrede okuma
Katı yüzeyde capture Ab Ag içeren hasta serum örneği Yıkama Spesifik bir saptayıcı antikor ilave edilir antijene bağlanır - Ag iki antikor arasında kalır
Enzimle işaretli ikincil Ab saptayıcı antikora Fc bölgesinden bağlanır Yıkama Substrat H2SO4 (Reaksiyonu durdurma) Spektrofotometrede okuma
- 4) YARIŞMACI (KOMPETATİF)ELISA:
- Serumda Ag Arama (Sıklıkla kullanılır)
- Katı yüzeyde Ab
- Şüpheli serum (Ag aranan klinik örnek) ve enzimli işaretli antijenin beraber konulduğu antijen rekabet (Competetive) yöntemidir.
- İşaretli antijen katı yüzeye bağlanırsa, substratla da birleşir RENK OLUŞUR.
- Bu sonuç klinik örnekteki Ag’nin olmadığı bir sonuçtur.
- Fakat klinik örnekteki antijen katı faza bağlanırsa enzim olmadığından substratla reaksiyon olmaz. RENK OLUŞMAZ.
- 5) YAKALAMALI (CAPTURE)ELISA:
Enfeksiyoz etkene yönelik, 1)Spesifik Ag saptama Katı faza poliklonal veya M.ab’lar konulur Poli Ab’ler, - M Ab’lere göre
- Farklı Ag epitoplarını
- bağladığı için güvenilirdir
- 5pg>5pg>
Do'stlaringiz bilan baham:
|